| 描述 |
Bay 60-7550 是有效,选择性的 PDE2 抑制剂,Ki 值为3.8 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Ki: 3.8±0.2 nM (PDE2)[1]
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| 体外研究 |
与对照相比,Bay 60-7550(1μM)增加神经元培养物中的cGMP [F(6,14)= 12.97,对于Bay 60-7550,p <0.05]。与NMDA单独相比,存在NMDA(60μM)的Bay 60-7550导致cGMP进一步增加。 NMDA受体拮抗剂MK-801(10μM)阻断Bay 60-7550 + NMDA诱导的神经元培养中cGMP的升高[1]。与未处理的对照细胞相比,BAY 60-7550(1μM)可显着降低IPAH患者PASMCs的增殖[2]。
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| 体内研究 |
PDE2抑制剂Bay 60-7550(1 mg/kg)可逆转束缚应激引起的行为改变,与车辆+束缚应激状况相比,导致开臂进入和开臂时间的百分比增加。在无应激小鼠中,与载体治疗组相比,Bay 60-7550产生开臂进入和开臂时间百分比的剂量依赖性增加;在3mg/kg的剂量下观察到显着的增加。在无应激小鼠中,与载体治疗的小鼠相比,Bay 60-7550以剂量依赖性方式增加头颅次数和头部倾斜时间;在剂量为1和3 mg/kg时观察到显着增加[1]。
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| 激酶实验 |
将COS-7细胞维持在37℃，5％CO2气氛中的完全DMEM（含10％胎牛血清，100单位/ mL青霉素G，100mg / mL链霉素和400μML-丙氨酰-L-谷氨酰胺）中。使用FuGENE6转染试剂将PDE2表达质粒导入COS-7细胞。在溶解缓冲液（275mM NaCl，1.5mM MgCl 2,2mM EGTA，2％Triton X，20％甘油和40mM Tris-HCl）中裂解细胞，并将细胞裂解物用于免疫沉淀程序。将蛋白A-琼脂糖珠浆液（100μL）用冰冷的磷酸盐缓冲盐水（100mM NaCl，2.7mM KCl，10.6mM Na 2 HPO 4和1.6mM NaH 2 PO 4）洗涤三次，并与5μgPDE2抗体混合。和100μL（2μg/μL）裂解物样品并在4℃下旋转过夜。然后将珠子/样品混合物在1000g下离心以从上清液中分离珠子。将珠子重悬于100μL冰冷的裂解缓冲液（20mM Tris，pH 7.4,140mM NaCl，0.75mM MgCl 2,1mM EGTA，1％Triton X-100和20％甘油，含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂）中。 ）洗脱PDE2用于酶活性测定。完成PDE2活性测定。将来自COS-7细胞表达并在KHEM缓冲液（50mM KCl，50mM HEPES，10mM EGTA和1.9mM MgCl 2，pH7.2）中稀释的重组PDE2酶与不同浓度的PDE2抑制剂（Bay 60-7550）混合。 ，ND7001和EHNA）和[3H] cGMP / cGMP（5μM）作为底物。然后将混合物在37℃下孵育30分钟（100μL反应体积）。为了将[3H] GMP转化为[3H]鸟苷，将样品与来自Crotalus atrox的蛇毒在37℃下孵育30分钟。然后将样品用新制备的Dowex /水/乙醇[1：1：1，v / v]浆液涡旋，然后离心10分钟。然后通过液体闪烁计数定量上清液中的[3H]鸟苷。将Bay 60-7550溶解在二甲基亚砜中，将EHNA溶解在蒸馏水中，并将ND7001作为10mM原液溶解在乙醇中，然后稀释用于20mM Tris，pH7.4的测定中;各溶剂的最终浓度不影响测定。通过每种PDE2抑制剂的对数浓度 - 响应曲线的非线性回归分析确定单一底物浓度下的IC 50值。 Ki值计算[1]。
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| 细胞实验 |
从BAY 60-7550（1μM），ANP治疗后，监测从特发性肺动脉高压（IPAH）患者分离的人远端肺动脉平滑肌细胞或来自接受移植或肺切除的成人对照细胞的可疑恶性肿瘤的生长情况。 1μM），DETA-NONOate（10μM）或曲前列环素（1μM），单独或组合使用[2]。
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| 动物实验 |
小鼠[1]使用体重28至35g的雄性ICR小鼠。 Bay 60-7550（0.5,1和3 mg / kg），ND7001（0.5,1.0和3 mg / kg），Detanonoate（0.5 mg / kg），L-NAME（50 mg / kg）或Diazepam（在束缚应激后和行为测试前30分钟施用1mg / kg）。小鼠也用Bay 60-7550（3 mg / kg），ND7001（3 mg / kg），Detanonoate，（0.5 mg / kg），L-NAME（50 mg / kg）或地西泮（1 mg / kg）治疗）在没有束缚压力的情况下;在行为测试前30分钟给药。与PDE1相比，Bay 60-7550对PDE2的选择性为50倍，与PDE5相比为100倍，与其他PDE家族相比，大于200倍。与其他PDE家族相比，ND7001对PDE2的抑制选择性提高了1倍。对于评估cGMP信号传导在PDE2抑制剂的行为影响中的作用的拮抗试验，在Bay 60-7550或ND7001之前20分钟施用可溶性鸟苷酸环化酶（20mg / kg）的抑制剂ODQ。
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| 参考文献 |
[1]. Masood A, et al. Anxiolytic effects of phosphodiesterase-2 inhibitors associated with increased cGMP signaling. J Pharmacol Exp Ther. 2009 Nov;331(2):690-9. [2]. Bubb KJ, et al. Inhibition of phosphodiesterase 2 augments cGMP and cAMP signaling to ameliorate pulmonary hypertension. Circulation. 2014 Aug 5;130(6):496-507.
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