| 描述 |
ZCL278 是一种选择性的 Cdc42 调节剂,直接结合到 Cdc42,且抑制其功能,Kd 为 11.4 μM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Kd: 11.4 μM (Cdc42)[1]
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| 体外研究 |
ZCL278是一种有效的,可透过细胞的Cdc42特异性抑制剂,可抑制基于肌动蛋白的细胞功能,包括高尔基体组织和细胞运动。在瑞士3T3成纤维细胞培养物中,ZCL278消除了显微镜形成并破坏了GM130对接的高尔基结构,其中两个最突出Cdc42介导的亚细胞事件。与选择性Rac抑制剂NSC23766相比,ZCL278减少了活性Cdc42的核周累积。 ZCL278在转移性前列腺癌细胞系(即PC-3)中抑制Cdc42介导的神经元分支和生长锥动力学以及基于肌动蛋白的运动和迁移,而不破坏细胞活力[1]。 ZCL278抑制Cdc42作为Junin病毒(JUNV)和水疱性口炎病毒,淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和登革病毒的进入抑制剂,但不抑制无包膜脊髓灰质炎病毒。在细胞中,ZCL278显示出有效抑制化学诱导的filopodium形成,这是一种依赖于Cdc42活性的过程。剂量反应实验首先在Vero细胞中进行,而ZCL278在高达200μM的浓度下无毒,而ZCL278抑制JUNV,IC50为~14μM,通过流式细胞术测量[2]。
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| 体内研究 |
ZCL278使脾脏中的JUNV RNA负荷降低33倍以上,8只小鼠中的5只小鼠无法检测到JUNV RNA。这些结果与加巴喷丁治疗小鼠的结果相似,证明ZCL278可以消除JUNV复制[2]。
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| 激酶实验 |
将冻干的Cdc42蛋白质在由50mM Tris，0.5mM MgCl 2,50mM NaCl，3％（wt / vol）蔗糖和0.6％葡聚糖组成的缓冲液中重构成5mg / mL。然后将储备溶液在5mM磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中稀释至1μM。在含有Cdc42溶液的石英比色杯中，加入等份的ZCL278并在每次荧光测量前温育5分钟。激发波长为275nm，每次添加后测量350nm处色氨酸的荧光。使用GraphPad中的等摩尔特异性结合模型拟合滴定曲线，并计算Kd [1]。
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| 细胞实验 |
为了确定细胞活力，将PC-3细胞与或不与Cdc42激活剂，ZCL278或NSC23766一起温育24小时。通过使用台盼蓝染料排除法，用Countess Automated Cell Counter获得活细胞和死细胞的数量。在每个实验中分配P值，并且拒绝概率水平<95％的任何零假设[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[2]四周龄C57BL / 6小鼠静脉内注射加巴喷丁或ZCL278（100μg/ g，ip）。在处理后1小时，用27 1/2的针头针对JUNV Candid＃1（1×106PFU）腹膜内接种小鼠，不超过1mL。在实验结束时，处死小鼠，用Dounce匀浆器将其脾脏匀浆并离心以产生细胞沉淀和上清液，并测定RNA表达水平。
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| 参考文献 |
[1]. Friesland A, et al. Small molecule targeting Cdc42-intersectin interaction disrupts Golgi organization and suppresses cell motility. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013 Jan 22;110(4):1261-6. [2]. Chou YY, et al. Identification and Characterization of a Novel Broad-Spectrum Virus Entry Inhibitor. J Virol. 2016 Apr 14;90(9):4494-510.
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