| 描述 |
R803 是一种有效的 HCV 复制抑制剂。作用于 HCV 基因型 1a 和 1b 复制子时 EC50 约为 30 nM,作用于基因型 2a 复制子时 EC50 约为 1000 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
EC50: ~30 nM (HCV genotype 1a and 1b replicons), ~1000 nM (HCV genotype 2a replicon)[1]
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| 体外研究 |
R803对HCV复制具有强效和高度特异性。 R803的抗病毒活性已经通过具有多次重复的报告子复制子测定确定为29.88±8.05nM,比母体化合物R706的活性提高约3倍。 Western印迹和TaqMan RT-PCR也证实R803对复制子的效力分别为约37nM和54.67±4.11nM。为了评估R803对细胞增殖的一般影响,用增加剂量的R803处理一组原代细胞和转化的人细胞系48小时,并通过基于MTS的细胞活力测定法测量对细胞增殖的影响。在没有病毒感染(CC50)的情况下,R803导致细胞数量减少50％的浓度范围为2μM至≥10μM,具体取决于细胞类型和增殖状态[1]。
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| 激酶实验 |
用PvuI限制酶使质粒PV-Luc线性化，并使用RiboMAX大规模RNA生产系统-T7进行体外转录。在DNase I消化和纯化后，将转录的RNA（5μg）在Gene Pulser II系统上以270V和950μF电穿孔到Huh-7细胞中。然后将细胞以10,000 /90μL/孔的密度分配到白色96孔板中。将R803在化合物稀释剂（10％DMSO，20％甲醇）中连续稀释，并以10μL的体积加入每个孔中。将板在37℃，5％CO 2下孵育18小时，然后使用Bright-Glo荧光素酶测定试剂盒[1]测定荧光素酶活性。
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| 细胞实验 |
在处理前24小时将复制子9-13细胞接种到6孔板上。在含有90％培养基，7.2％1×PBS，1.8％甲醇，1％DMSO，20μMRBV和不同浓度的IFN-α的混合物中制备R803的系列稀释液，用于固定比例的剂量反应研究。用指定的R803（0至80nM浓度）和IFN-α（0至4IU / mL）加20μMRBV的组合处理细胞72小时;然后将它们用PBS洗涤，在SDS上样缓冲液中裂解，并通过Western印迹分析[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Huang P, et al. Discovery and characterization of substituted diphenyl heterocyclic compounds as potent and selective inhibitors of hepatitis C virus replication. Antimicrob Agents Chemother. 2008 Apr;52(4):1419-29.
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