5'-三磷酸腺苷二钠盐 三水合物

方法一、以免肉为原料
兔肉松的制备 将冰冻过的兔体迅速去骨后绞碎，加入3-4倍量的95%乙醇，搅拌30min后过滤，制成肉糜，再加入2-2.5倍的乙醇重复上述操作，将肉糜置于乙醇中，加热煮沸5min，取出并迅速置于冷却的乙醇中降温至10℃以下，过滤并压干，将肉饼捣碎后冷风吹干制得兔肉松。
兔肉[绞碎]→[冰浴]肉糜[95%冷乙醇]→[30min]变性肉糜[95%乙醇]→[煮沸5min]肉饼[捣碎，吹干]→[<10℃]肉松
提取、吸附、洗脱 将肉松加入4倍量的蒸馏水，搅拌30min，过滤压成肉饼，捣碎后再加3倍量的蒸馏水重复上述操作，将两次的滤液合并，加入总体积4%的冰醋酸，用6mol/L盐酸调pH为3，冰浴冷却后过滤，滤液经阴离子交换树脂吸附，用pH3、0.03 mol/L氯化钠溶液洗涤柱上滞流的AMP、ADP及无机盐等至薄层层析检查无AMP、ADP斑点而有ATP斑点出现时，再用pH 3.8、1mol/L氯化钠液洗脱ATP，收集洗脱液，为防止ATP的水解，上述过程应在0-10℃进行。

除热原及杂质、结晶、干燥 洗脱液用0.6%的硅藻土和0.4%的活性炭除去热原及杂质，然后用6mol/L盐酸调pH为2.5-3，在28℃恒温水浴中加 3-4倍量的95%乙醇，使ATP-二钠盐结晶，收集结晶，干燥，得ATP成品。
ATP洗脱液[硅薄土，活性炭]→[10min]滤液[乙醇]→[pH2.5-3, 28℃]ATP成品
方法二、光合磷酸化法
叶绿体混悬液的制备 新鲜菠菜叶7kg，用水洗净后加入Tris缓冲液10L，搅碎后离心，即得。
新鲜菠菜叶[Tris缓冲液]→[捣碎3min，离心]叶绿体混悬液
肌激酶的制备 将乙二胺四乙酸钠27.9g和氢氧化钠63g加冷蒸馏水溶解后，稀释，至37.5L。取家兔肌肉，浸入冰块中，搅碎成肉浆，加入等体积的乙二胺四乙酸钠-氢氧化钠溶液，搅拌提取10min，离心，取上清液，加入总体积的0.05倍的2mol/L盐酸，水浴加热至90℃，保温3min后，置冰浴中降温至20℃，加2mol/L氢氧化钠调pH至6.5，离心，取上清液装瓶密封，冰箱冷冻保存。
兔肉[乙二胺四乙酸钠，氢氧化钠]→[10min]肌激酶
光合反应 将磷酸氢二钠150g用2L蒸馏水溶解后，再加入Tris50g、 AMP55g，搅拌使其溶解，加水稀释至4L，加6mol/L盐酸调pH至7.8-7.9。将该溶液与含ATP55g的0.308%二氮蒽甲硫酸盐溶液50ml及肌激酶250ml的混合溶液混合，加入叶绿体混悬液中，保持pH7.9-8，开始进行光照，光照时保持温度为18℃左右，至反应终点(约1.5h)时停止照光，稍冷却，搅拌下加入40%三氯乙酸凝固蛋白，过滤，上清液作进一步处理。
5'-AM[磷酸氢二钠，Tris, 二氮蒽甲硫酸]→[10min]混合液[碘钨灯，光照]→[pH8, 18℃]反应液[40%三氯乙酸]→[<10℃]上清液
三磷酸腺苷二钠的提取
汞盐法提取 上清液搅拌下加入硝酸汞溶液500ml(重量比为硝酸汞：硝酸：蒸馏水=2.5：0.9：2的混合溶液)静置1h，过滤，滤饼用冷蒸馏水洗涤后加1.1L蒸馏水，成细浆状混悬液，冰浴冷却，使温度降至3℃以下，保持温度不超过5℃，通入硫化氢气体，当溶液全部变黑时(约需25 min)，离心，上清液经用酸处理过的滤纸浆过滤，滤液加入5mol/L的氢氧化钠液，调pH=3.8，再加入溶液总量的千分之五的5mol/L的氯化钠和三倍量体积的95%的乙醇，冰箱中放置过夜，收集沉淀，将沉淀中加入丙酮研磨脱水，直至全部成粉末状，丙酮洗涤2-3次，真空干燥即得三磷酸腺苷二钠。
上清液[硝酸，硝酸汞]→[1h]ATP汞盐[硫化氢气体]→[5℃，20-25min]ATP溶液[5mol/L氢氧化钠，氯化钠，乙醇]→[pH3.8]ATP钠盐[丙酮脱水]→[五氧化二磷减压干燥]ATP成品
树脂法提取 将上清液中加入3-4倍体积的95%乙醇，搅拌，冷却放置4-5 h，过滤，得粗品。将粗品溶解在少量蒸馏水中，加入1/2粗品质量的硅藻土，搅拌吸附杂质，过滤。滤液上732H⁺阳离子树脂柱，当流出液的pH值由6下降至1，又上升到2时，表明柱内水已流完，即开始收集。将流出液用6mol/L的氢氧化钠调pH=6.5-7后，上717C1^-型阴离子交换树脂柱，用25%的乙酸钡检查流出液，有白色沉淀出现时，说明吸附ATP和ADP足量，即可洗脱。先用pH2.5、0.003mol/L盐酸溶液(含0.03mol/L氯化钠)洗脱，电泳检查流出液至ADP消失，260nm吸收值降至稳定，并略有回升时，说明有ATP出现，停止洗脱。洗脱下的ADP溶液调pH至7，用阴离子树脂柱浓缩回收。然后用 pH3.8、1mol/L氯化钠溶液洗脱，至流出液不再被乙醇沉淀为止，洗脱下的ATP溶液按1：1的量加硅藻土过滤除热原，调pH=3.8，加3-4倍体积的45%的乙醇，放置过夜。过滤，分别用无水乙醇和乙醚洗涤，脱水，真空干燥，即得ATP成品。

方法三、氧化磷酸化法
氧化 将AMP50g用2L水溶解，如有不溶用6mol/L的氢氧化钠调节至全溶。取磷酸氢二钾184.8g，磷酸二氢钾57.5g，硫酸镁17.5g，溶于5L自来水中。将两溶液混合，加入新鲜酵母2kg，葡萄糖175g，在30-32℃下缓慢搅拌，使其发酵，电泳法或测定无机磷方法观察转化情况，当部分AMP转化时，可提高温度至37℃，AMP斑点消失时为反应终点，约需4-6h。反应液冷却至15℃加入40%三氯乙酸500ml，并用盐酸调pH=2，过滤，得