二苄基荧光素

二苄基荧光素用途

二苄基荧光素(DBF)是一种荧光探针(荧光染料),作为特定细胞色素P450(CYP)亚型的底物,包括CYP3A4、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19和芳香化酶(CYP19)。二苄基荧光素通常在其Km值为0.87-1.9µM(Ex=485nm,Em=535nm)附近使用。二苄基荧光素用于检测药物或疾病引起的CYP催化活性的变化[1][2][3][4]。

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二苄基荧光素名称

[ CAS 号 ]:
97744-44-0

[ 中文名 ]:
二苄基荧光素

[ 英文名 ]:
Dibenzylfluorescein

二苄基荧光素生物活性

[ 描述 ]:

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 代谢酶/蛋白酶 >> 细胞色素P450

研究领域 >> 其他

[体外研究]

P450催化的二苄基荧光素代谢和碱的影响实验方法[3] ：反应过程：二苄基荧光素被 P450脱烷基生成荧光素苄基酯,如果存在氢氧化钠可使其水解成荧光素。加入 2米氢氧化钠也会使二苄基荧光素分解成荧光素苄基醚。 1.密码2c19酶活性和抑制实验条件 150μL反应体系为： 0.1 M Tris-HCl缓冲液 (pH 7.4)、10μM二苄基荧光素、15pmol CYP2C19酶和 NADPH再生系统 50μLNADPH再生系统体系为：1.13 mM NADP、12.5 mM异柠檬酸、56.33 mM KCl、187.5 mM Tris-HCl、pH 7.4、12.5 mM MgCl2、0.0125 mM MnCl2和 0.075 U/ml异柠檬酸脱氢酶。 2.样品在 37°C下孵育 30-60分钟。快速冷却至 4°C终止反应,离心后上清液进行 LC-MS分析。 3.在没有和有 2 M氢氧化钠情况下,以纯二苄基荧光素、荧光素苄酯、荧光素苄醚和荧光素 (均为 10μM)为标准品进行分析。

[参考文献]

[1]. Stresser DM., et al. Substrate-dependent modulation of CYP3A4 catalytic activity: Analysis of 27 test compounds with four fluorometric substrates. Drug Metabolism and Disposition 28(12), 1440-1448 (2000).

[2]. Donato MT., et al. Fluorescence-based assays for screening nine cytochrome P450 (P450) activities in intact cells expressing individual human P450 enzymes. Drug Metab. Dispos. 32(7), 699-706 (2004).

[3]. Salminen KA, et al. Simple, direct, and informative method for the assessment of CYP2C19 enzyme inactivation kinetics. Drug Metabolism and Disposition 39(3), 412-418 (2011).

[4]. Moutinho D, et al. Altered human CYP3A4 activity caused by Antley-Bixler syndrome-related variants of NADPH-cytochrome P450 oxidoreductase measured in a robust in vitro system. Drug Metabolism and Disposition 40(4), 754-760 (2012).