瑞格非尼的作用和生物活性

发布时间:2018-11-07 15:08:46 编辑作者:活性达人

瑞格非尼图片

图片:瑞格非尼结构式

瑞格非尼是一种激酶抑制剂,它的作用机制是蛋白激酶抑制剂和细胞色素P4502C9抑制剂。那么它的生物活性是什么?如何做实验呢?下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍瑞格非尼的生物活性:

1)体外活性
瑞格非尼有效抑制NIH-3T3/VEGFR2细胞中的VEGFR2自身磷酸化,IC50为3nM。在HAoSMCs中,瑞格非尼在用PDGF-BB刺激后抑制PDGFR-β自身磷酸化,IC50为90nM。瑞格非尼抑制VEGF165刺激的HUVECs的增殖,IC50为3nM[1]。瑞格非尼引起Hep3B细胞生长的浓度依赖性降低,IC50为5μM。瑞格非尼随后增加了磷酸化c-Jun(一种JNK靶标)的水平,但未增加Hep3B细胞中的总c-Jun[3]。

瑞格非尼非常有效地抑制突变受体KITK642E和RETC634W,IC50分别是大约20nM和10nM。瑞格非尼抑制经过VEGF165刺激后的人脐静脉内皮细胞的增殖,IC50为大约3nM。瑞格非尼抑制FGF2刺激的HUVECs和PDGF-BB刺激的HAoSMCs的增殖,IC50分别是127nM和146nM。

瑞格非尼通过抑制酪氨酸激酶受体(VEGFR,KIT,RET,FGFR和PDGFR)和丝氨酸/苏氨酸激酶受体(RAF和p38MAPK)来靶向作用于肿瘤细胞增殖和肿瘤脉管系统。瑞格非尼以浓度依赖和时间依赖方式抑制人Hep3B,PLC/PRF/5和HepG2细胞的生长。瑞格非尼强烈抑制NIH-3T3/VEGFR2细胞中的VEGFR2自磷酸化,IC5​​0为3nM。瑞格非尼在HAoSMCs中,抑制PDGFR-β经过PDGF-BB刺激后的自磷酸化,IC50为90nM。瑞格非尼在MCF-7乳腺癌细胞中,也会抑制FGF10刺激后纤维母细胞生长因子受体的信号传导。

2)体内活性
瑞格非尼在剂量范围10-100mg/kg下有效抑制Colo-205异种移植物的生长,在第14天以10mg/kg剂量达到75%的TGI。在MDA-MB-231模型中,瑞格列尼在低至3mg/kg的剂量下非常有效,导致显着的TGI为81%,在10和30mg/kg的剂量下增加至93%,其中肿瘤达到了停滞[1]。

瑞格非尼不仅可以抑制在脂肪垫中原位生长的同基因原发性4T1乳腺肿瘤的生长,还可以抑制肺部肿瘤转移的形成。瑞格非尼在多种临床前人类异种移植的小鼠模型中,显示有效的肿瘤生长抑制性,这种抑制具有剂量依赖特性,表现为在乳腺MDA-MB-231和肾脏786-O肿瘤模型中肿瘤减小。

我们已经了解了它的生物活性,接下来如何做活性实验呢?一般来说,有如下的三种方法:

1)动物实验
按照联邦指南保存的雌性无胸腺NCrnu/nu小鼠皮下接种5×106个Colo-205或MDA-MB-231细胞或植入1mm3786-O肿瘤碎片。当肿瘤达到100mm3时,瑞格非尼或载体对照在786-O模型中口服qd×21,在Colo-205和MDA-MB-231模型中分别以剂量100,qd×9,30,10和3毫克/千克。紫杉醇每2天×10以乙醇/CremophorEL/盐水(12.5%/12.5%/75%)静脉内施用10mg/kg。每周估计肿瘤大小(体积)(l×w2)/2,并且从终末肿瘤重量(1-T/C×100)获得肿瘤生长抑制百分比(TGI)。从治疗的第一天开始每隔一天对小鼠称重。每天监测小鼠的一般健康状况。

2)细胞实验
对于增殖测定,GIST882和TT细胞在含有L-谷氨酰胺的RPMI培养基中生长,MDA-MB-231,HepG2和A375细胞在DMEM中总是含有10%hiFBS。将细胞用胰蛋白酶消化,以5×104个细胞/孔铺板于含有10%FBS的完全培养基中的96孔板中,并在37℃下生长过夜。第二天,将在完全生长培养基中连续稀释至10μM至5nM终浓度的载体或瑞格非尼加入0.2%DMSO,并继续培养96小时。使用CellTitre-GloTM定量细胞增殖。

3)激酶实验
初始体外激酶抑制分析在MilliporeCorporation以Millipore标准条件下固定的1μM化合物浓度[10μM腺苷-5'-三磷酸(ATP)浓度]进行。从选定的响应激酶,例如VEGFR1和RET确定50%的抑制浓度(IC50)值。使用谷胱甘肽-S-转移酶的重组融合蛋白,TIE2的细胞内结构域和肽生物素-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG作为底物,用均相时间分辨荧光(HTRF)测定法测量TIE2激酶抑制。

今天介绍了瑞格非尼的作用,并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述,瑞戈非尼(BAY73-4506)是一种多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂,抑制VEGFR1/2/3,PDGFRβ,Kit,RET和Raf-1的IC50分别为13/4.2/46,22,7,1.5和2.5nM。瑞格非尼的靶点活性为Kit,7nM;Raf-1,2.5nM;RET,1.5nM;VEGFR1,13nM;VEGFR2,4.2nM。

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参考文献:
[1]. Wilhelm SM, et al. Regorafenib (BAY 73-4506): a new oral multikinase inhibitor of angiogenic, stromal and oncogenic receptor tyrosine kinases with potent preclinical antitumor activity. Int J Cancer, 2011, 129(1), 245-255.
[2]. Heng DY, et al. Targeted therapy for metastatic renal cell carcinoma: current treatment and future directions. Ther Adv Med Oncol, 2010, 2(1), 39-49.
[3]. Carr BI, et al. Fluoro-Sorafenib (Regorafenib) effects on hepatoma cells: growth inhibition, quiescence, and recovery. J Cell Physiol, 2013, 228(2), 292-297.
[4]. Wagner J, et al. Anti-tumor effects of ONC201 in combination with VEGF-inhibitors significantly impacts colorectal cancer growth and survival in vivo through complementary non-overlapping mechanisms. J Exp Clin Cancer Res. 2018 Jan 22;37(1):11.
[5]. Matsuoka K, et al. Effective Sequential Combined Chemotherapy with Trifluridine/Tipiracil and Regorafenib in Human Colorectal Cancer Cells. Int J Mol Sci. 2018 Sep 25;19(10). pii: E2915.

相关化合物:瑞格非尼

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