依达奴林的作用 - 生物活性 - 靶点活性

依达奴林，又称RG7388，CAS号1229705-06-9，依达奴林是一种有效，选择性的 MDM2 拮抗剂，能够抑制 p53-MDM2 的结合，IC50 值为 6 nM。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍依达奴林的生物活性：

1）体外活性
依达奴林抑制细胞增殖，IC50为30 nM，诱导剂量依赖性p53稳定，细胞周期停滞，以及表达野生型p53的癌细胞中的细胞凋亡[1]。依达奴林（300 nM或1.8μM）诱导SJSA骨肉瘤细胞凋亡[2]。

2）体内活性
在小鼠SJSA人骨肉瘤异种移植模型中，依达奴林（Idasanutlin，25mg / kg p.o.）导致肿瘤生长抑制和消退[1]。在SJSA异种移植模型中，RG7388诱导细胞凋亡和抗增殖[2]。

我们已经了解了依达奴林的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
通过四唑染料测定评估细胞增殖。从浓度的对数对抑制百分比的图的线性回归确定细胞增殖的50％抑制（IC 50）或90％抑制（IC 90）的浓度。

2）动物实验
在10至12周龄时，给小鼠植入悬浮在无酚基质胶和PBS中的人SJSA骨肉瘤细胞（ATCC）的1：1混合物。 将小鼠植入右侧，浓度为5×106个细胞，总体积为0.2mL。在大约第10天，根据肿瘤体积随机化动物，使得10只随机化小鼠的所有组具有相似的起始平均肿瘤体积100至250mm 3。依达奴林作为无定形固体分散体微泡沉淀物粉末给药，其含有30％药物物质和70％乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素聚合物，其在施用前立即重构为Klucel / Tween中的悬浮液，并且在给药后丢弃剩余的悬浮液。

3）激酶实验
p53-MDM2 HTRF测定在含有50mM Tris-HCl，pH7.4,100mM NaCl，1mM DTT，0.02或0.2mg / mL BSA的缓冲液中进行。将小分子抑制剂以等分试样的形式储存在DMSO中的10mM储备溶液中，在4℃下在96深孔板中。在测试之前立即将其解冻并混合。 将化合物与GST-MDM2和生物素化的p53肽在37℃温育1小时。然后加入Phycolink山羊抗GST（1型）别藻蓝蛋白和Eu-8044-链霉抗生物素蛋白，然后在室温下孵育1小时。使用Envision荧光读数器读取平板。IC50值由板间重复或一式三份数据组确定。

今天介绍了依达奴林的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，依达奴林（RG-7388）是一种有效且特异的p53-MDM2抑制剂（IC50：6nM）。它的靶点活性是Mdm2,6nM。

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参考文献：
[1]. Ding Q, et al. Discovery of RG7388, a potent and selective p53-MDM2 inhibitor in clinical development. J Med Chem. 2013 Jul 25;56(14):5979-83.
[2]. Higgins B, et al. Preclinical optimization of MDM2 antagonist scheduling for cancer treatment by using a model-based approach. Clin Cancer Res. 2014, 20(14), 3742-3752.