| 体外研究 |
一般方案 1.DAPI二内酰胺工作液的制备 1.1储备液的制备 将 5 mg DAPI二乳酸溶解于 1 mL ddH2O以获得 5 mg/mL的储备液 (DAPI,二乳酸10.9mM)注意：建议将储备液储存在 -20°C或 -80°C避光条件下,避免反复冻融。 1.2 DAPI二内酰胺工作液的制备 将原液在PBS中以1:5000稀释至1μg/mL将工作溶液保存在4°C注意：请根据需要调整 DAPI二乳酸工作液的浓度 2.细胞染色 2.1悬浮细胞 (96孔板) a。在 4°C下以 1000克离心 3-5分钟,然后弃去上清液。PBS洗涤2.次,每次5.分钟。细胞密度为×106/mLb。加入1毫升工作液,室温孵育3-10分钟。 c.4℃、400克离心 3-4分钟,弃上清。 d。用 PBS洗涤 2.次,每次 5.分钟。 e。用无血清细胞培养基或 PBS重悬细胞。荧光显微镜或流式细胞术观察。 2.2贴壁细胞 a。在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。 b从培养基上取下盖玻片并吸出多余的培养基。 c加入100μL工作液,轻摇使之完全覆盖细胞,室温孵育 3-10分钟。 d。用培养基洗涤2.次,每次 5.分钟。荧光显微镜或流式细胞仪观察。 注意事项 长期储存时,可将储备溶液等分并储存于 ≤-20°C短期保存时,可将溶液置于 2-6°C避光保存。如果处理得当,DAPI溶液至少可稳定保存 6.个月。
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