| 描述 |
Capzimin是有效的,特异性适中的,蛋白酶体异肽酶 Rpn11 抑制剂。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Target: Rpn11[1]
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| 体外研究 |
Capzimin(3027)显示Rpn11相对于Csn5的选择性为80倍,比AMSH高10倍,比BRCC36高6倍(IC50 =30μM,4.5μM和2.3μM。Capzimin针对60种癌细胞系的NCI组进行筛选GI50的中位数为3.3μM.Capzimin在白血病细胞中表现出良好的活性,包括SR和K562细胞系(GI50值分别为0.67μM和1μM),以及几种实体肿瘤细胞系,包括NCI-H460(非小细胞)细胞肺癌; GI50 =0.7μM)和MCF7(乳腺癌; GI50 =1.0μM)。在HCT116细胞中加工形式的caspase 3和caspase-cleaved poly ADP-ribose聚合酶的免疫印迹证实Capzimin不仅阻断细胞生长,但也诱导细胞凋亡[1]。
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| 激酶实验 |
荧光偏振测定在小体积384孔固体黑色板中进行，一式四份。在含有50mM Tris-HCl pH7.5,1mMMgCl2,50μMATP，1mM DTT和0.01％NP-40的缓冲液中进行测定。按以下顺序添加测定组分：1）不同浓度的5μL化合物（Capzimin等）（在3％DMSO中），2）5μL稀释的人26S蛋白酶体，和3）5μL底物（3nM Ub4-肽X）。对于用Zn（cyclen）2+进行的实验，在滴定反应中存在100μMZn（cyclen）2+。荧光偏振在30℃下测量，激发波长为480nm，发射波长为520nm。将收集的数据标准化为DMSO对照并拟合至剂量 - 反应曲线以确定IC 50值[1]。
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| 细胞实验 |
在正常或低血清培养基中用不同浓度的3021或Capzimin处理HCT116细胞72小时，然后与CellTiter-Glo试剂混合以估计细胞增殖。将测量的发光值标准化为DMSO对照，并将数据拟合至剂量 - 响应方程以确定GI50 [1]。
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| 参考文献 |
[1]. Li J, et al. Capzimin is a potent and specific inhibitor of proteasome isopeptidase Rpn11. Nat Chem Biol. 2017 May;13(5):486-493.
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