| 描述 |
GSK 2830371 是一种选择性的Wip1磷酸酶 (Wip1 phosphatase)抑制剂,IC50 为 6 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 6 nM (Wip1 phosphatase)[1]
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| 体外研究 |
GSK 2830371有效抑制FDP和内源性底物磷酸化p38 MAPK(T180)的Wip1(2-420)去磷酸化,IC50值分别为6 nM和13 nM。在PPM1D扩增的MCF7乳腺癌细胞中,用GSK 2830371(0.04,0.11,0.33,1,3和9μM)处理以浓度依赖性方式增加底物的磷酸化。用GSK 2830371(0.001,0.01,0.1,1和10μM)处理MX-1和MCF7细胞(Wip1amplified,p53野生型)导致细胞生长测定中的浓度依赖性效应[1]。 GSK2830371在MCF-7细胞中具有2.65μM±0.54(SEM)的50％生长抑制浓度(GI50)。用2.5μMGSK2830371处理MCF-7细胞导致WIP1的两种同种型在8小时内显着的时间依赖性降解,这与p53稳定化和磷酸化p53Ser15(pp53Ser15)相关[2]。
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| 体内研究 |
在药效学测定中,口服施用GSK 2830371增加Chk2(T68)和p53(S15)的磷酸化并降低DOHH2肿瘤中的Wip1蛋白浓度。在150mg/kg体重,BID(每天两次)和TID(每天三次)口服给药14天后,GSK 2830371分别抑制DOHH2肿瘤异种移植物的生长41％和68％。在用每公斤体重75或150mg治疗的BID小鼠中观察到可比较的肿瘤生长抑制。 TID方案中较大的肿瘤生长抑制与GSK 2830371在小鼠中的短半衰期一致,并且表明可能需要持续抑制Wip1以获得最大的抗肿瘤作用[1]。
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| 激酶实验 |
初步体外Wip1酶测定法测量由二磷酸荧光素（FDP）的Wip-1（2-420）水解产生的荧光。在室温下向50μMFDP底物加入GSK 2830371或DMSO，然后在测定缓冲液（50mM TRIS，pH 7.5,30mM MgCl 2,0.8mM CHAPS，0.05mg / mL BSA）中加入10nM Wip1。在Spectramax酶标仪（485 / 530nm）上检测荧光信号[1]。
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| 细胞实验 |
将细胞以每孔200-400个细胞接种到96孔板中，并在第1天用GSK 2830371稀释系列处理.7天后，我们使用CellTiter-Glo细胞活力测定来确定对细胞生长的影响。在EnVision 2104上检测发光信号。对于克隆形成测定，将细胞以每孔2,000个细胞接种在12孔组织培养板中。在第1天用化合物稀释系列处理细胞，并在第7天再次处理细胞.14天后，用1×PBS洗涤细胞，用1mL考马斯亮蓝R-250染色，并用Optomax Sorcerer菌落定量菌落。计数器[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[1]用1×107DOHH2细胞皮下接种雌性SCID小鼠，用电子卡尺监测肿瘤生长。当肿瘤达到100-200mm 3时，每天用载体（2％DMSO和40％Captisol，pH4.0）或GSK 2830371口服治疗动物两次（BID）或三次（TID）。对于功效研究，每组施用8只小鼠。用GSK 2830371每公斤体重75或150毫克BID或每公斤体重TID 150毫克。当载体对照小鼠的肿瘤超过1,000mm 3（第11天）时，计算肿瘤生长抑制（与对照相比肿瘤生长的％差异）。对于药效学生物标志物分析，在用载体或GSK 2830371以75或150mg / kg体重，BID处理14天后，在最终剂量后2或4小时收获来自三只小鼠的DOHH2肿瘤;将肿瘤在液氮中冷冻用于随后的裂解和蛋白质印迹分析。
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| 参考文献 |
[1]. Gilmartin AG, et al. Allosteric Wip1 phosphatase inhibition through flap-subdomain interaction. Nat Chem Biol. 2014 Mar;10(3):181-7. [2]. Esfandiari A, et al. Chemical Inhibition of Wild-Type p53-Induced Phosphatase 1 (WIP1/PPM1D) by GSK2830371 Potentiates the Sensitivity to MDM2 Inhibitors in a p53-Dependent Manner. Mol Cancer Ther. 2016 Mar;15(3):379-91.
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