| 描述 |
MLi-2是高效选择的,具有口服活性,可渗透大脑的LRRK2抑制剂。IC50值为0.76 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 0.76 nM (LRRK2)[1]
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| 体外研究 |
MLi-2在体外纯化的LRRK2激酶测定中表现出优异的效力(IC50 = 0.76nM),监测LRRK2 pSer935 LRRK2的去磷酸化的细胞测定(IC50 = 1.4nM)和放射性配体竞争结合测定(IC50 = 3.4nM)。除了多种受体和离子通道外,MLi-2对超过300种激酶的选择性超过295倍[1]。
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| 体内研究 |
如通过pSer935 LRRK2的去磷酸化所测量的,MLi-2小鼠中的急性口服和亚慢性剂量给药在24小时期间导致剂量依赖性中枢和外周靶标抑制。在脑和血浆暴露的15周时间内,用MLi-2治疗MitoPark小鼠具有良好的耐受性。在MLi-2处理的MitoPark小鼠中观察到肺的形态学变化,与II型肺细胞增大一致[1]。
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| 激酶实验 |
通过在100％DMSO中将10mM MLi-2储备液稀释至顶部浓度98μM，然后在DMSO中1：2.15连续稀释9次来制备MLi-2剂量反应。通过Labcyte Echo将400纳升每种稀释液点样到384孔黑色侧板上，然后在1x测定缓冲液中点样10μL2.5nM酶溶液。在室温下孵育30分钟后，开始激酶反应，在1x测定缓冲液中加入10μL800nM荧光素标记的LRRKtide肽底物和186μMATP溶液。使反应在25℃下进行1小时。然后通过加入20μL含有4nM Tb标记的抗磷酸LRRKtide抗体和20mM EDTA的TR-FRET稀释缓冲液终止反应。在室温下孵育1小时后，在340,520和495nm [1]上读板。
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| 动物实验 |
小鼠：将MLi-2悬浮于30％Captisol中，并以10mL / kg的体积给药。剂量计算基于活性部分。小鼠接受MLi-2 [1-100 mg / kg;口服（PO）]，或安乐死前1小时过量的二氧化碳。在安乐死之后，立即解剖小鼠大脑皮层并在干冰上在钢板上冷冻，以通过蛋白质印迹分析pSer935 LRRK2。收集血浆和脑样品并冷冻以通过LC-MS / MS测定MLi-2水平[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Fell MJ, et al. MLi-2, a Potent, Selective, and Centrally Active Compound for Exploring the Therapeutic Potential and Safety of LRRK2 Kinase Inhibition. J Pharmacol Exp Ther. 2015 Dec;355(3):397-409.
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