| 描述 |
BX-912 是一种有效的 PDK1 抑制剂,IC50 为 12 nM。
|
| 相关类别 |
|
| 靶点 |
IC50: 12 nM (PDK1), 110 nM (PKA), 410 nM (KDR), 650 nM (CDK2/cyclin E), 830 nM (Chck1), 850 nM (c-Kit), 1.25 μM (PKC), 2.1 μM (T-Fyn), 6.1 μM (Insulin receptor), 7.4 μM (GSK3β)[1]
|
| 体外研究 |
BX-912还抑制PKA,KDR,CDK2 /细胞周期蛋白E,Chck1,c-Kit,PKC,T-Fyn,胰岛素受体和GSK3β,IC50分别为110 nM,410 nM,650 nM,830 nM,850 nM,1.25分别在激酶测定中μM,2.1μM,6.1μM和7.4μM。在测量PDK1-和PtdIns-3,4-P2-介导的Akt活化的偶联测定中鉴定BX-912,其可以检测PDK1,AKT2的抑制剂或对AKT2活化至关重要的其他步骤。 BX-912以直接激酶测定形式(IC50 = 26)有效抑制PDK1酶活性,尽管BX-912不能阻断预活化的AKT2活性(IC50>10μM)。 BX-912与PDK1的ATP结合位点结合。 BX-912的氨基嘧啶骨架在PDK1的活性位点采用相似的取向。为了检测BX-912的激酶选择性,测定其对10种不同Ser/Thr和酪氨酸激酶的体外活性的影响,包括相关的AGC激酶PKA和PKCα。相对于PKA,BX-912对PDK1具有9倍选择性。 BX-912阻断PTEN阴性PC-3细胞中的PDK1活性。 PTEN阴性PC-3细胞显示出Akt的组成型活化,这反映在高水平的PDK1产物磷酸-Thr308-Akt [1]中。
|
| 激酶实验 |
在直接激酶测定和测量PDK1和PtdIns-3,4-P2介导的AKT2活化的偶联测定形式中测定PDK1。对于偶联测定，最终测定混合物（60μL）含有：15mM MOPS，pH 7.2,1mg / mL牛血清白蛋白，18mMβ-甘油磷酸酯，0.7mM二硫苏糖醇，3mM EGTA，10mM MgOAc，7.5。 μMATP，0.2μCi[γ-33P] ATP，7.5μM生物素化肽底物（生物素-ARRRDGGGAQPFRPRAATF），0.5μL含PtdIns-3,4-P2的磷脂囊泡，60μg纯化的重组人PDK1和172 ng纯化的重组人AKT2。在室温下温育2小时后，在链霉抗生物素蛋白包被的SPA珠上从10μL测定混合物中捕获生物素标记的肽，并通过Wallac MicroBeta计数器中的闪烁接近来测量产物形成。形成的产物与孵育时间和加入的PDK1和非活性AKT2的量成比例。 PDK1的添加水平不是很理想，因此该检测方法可以灵敏地检测AKT2激活抑制剂以及PDK1或AKT2的直接抑制剂[1]。
|
| 细胞实验 |
细胞系MDA-468，MDA-453，HCT-116，U87-MG，U2OS，PC-3，B16F10和MiaPaCa; LOX无色素人黑素瘤细胞;将以低密度（1,500-3,000个细胞/孔，0.1mL /孔，96孔板）接种的HeLa细胞和HeLa细胞培养过夜。通过在1％DMSO和生长培养基（DMSO的终浓度，0.1％）中加入10μL/孔的BX-912（1,10,100和1000nM），然后短暂摇动来进行化合物处理。将处理过的细胞培养72小时，通过加入10μL代谢染料WST-1测量活力。在平板阅读器中在450nm处读取WST-1信号，并减去无细胞或零时间背景，以计算净信号[1]。
|
| 参考文献 |
[1]. Feldman RI, et al. Novel small molecule inhibitors of 3-phosphoinositide-dependent kinase-1. J Biol Chem. 2005 May 20;280(20):19867-74.
|
