CNX-1351

CNX-1351 是一种有效的选择性 PI3Kα 抑制剂,IC50 为 6.8 nM。

研究领域 >> 癌症

PI3Kα:6.8 nM (IC50)

PI3Kβ:166 nM (IC50)

PI3Kδ:240.3 nM (IC50)

PI3Kγ:3020 nM (IC50)

CNX-1351能够有效(EC50 <100nM)并且特异性地抑制PI3Kα依赖性癌细胞系中的信号传导,并且这导致有效的抗增殖作用(GI50 <100nM)。 CNX-1351抑制SKOV3细胞中的PI3K信号传导,其效力(EC50为10-100nM)与pan-PI3K抑制剂相似。为了研究抑制PI3Kα在细胞中的功能性结果,用CNX-1351处理具有不同PIK3CA活化突变的两种细胞系,SKOV3卵巢癌细胞(H1047R)和MCF-7乳腺癌细胞(E545K),并监测生长。通过暴露于CNX-1351 96小时(GI50分别为78和55nM),PIK3CA驱动的细胞系均受到生长抑制[1]。

CNX-1351抑制小鼠脾脏中的p-AktSer473并在体内与PI3Kα结合。 CNX-1351以100mg/kg每天一次递送至裸鼠的腹膜腔中,连续5天(每组n = 3只小鼠)。在最后一次剂量(1-24小时)后的指定时间从小鼠收获脾脏,并通过免疫印迹询问P-AktSer473或PI3Kα占据。在最后一次给药后1小时和4小时,PI3K信号传导的抑制被检测为P-AktSer473的减少[1]。

CNX-1351在一组10种脂质激酶中进行测试。 CNX-1351s以10浓度IC50曲线进行测试，3μF连续稀释，起始浓度为1μM。反应在10μMATP下进行。 HTRF测定形式用于PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kγ和PI3Kδ; ADP-GLO测定形式用于其他激酶。使用以下底物：对于HTRF，磷脂酰肌醇4,5-二磷酸酯;对于SPHK1和SPHK2，鞘氨醇;对于其他ADP-GLO酶，磷脂酰肌醇。对于一般的激酶选择性，CNX-1351在激酶选择性小组中使用HotSpot技术和基于放射性同位素的P81过滤进行。将CNX-1351溶解在纯DMSO中至最终的1μM测试浓度。针对CNX-1351测试的各种激酶的底物每天在反应缓冲液中新鲜制备。然后将任何所需的辅因子加入到底物溶液中，然后加入激酶并在室温下预孵育30分钟。将33P-ATP（10μM）输送到反应混合物中以引发反应，并在室温下继续反应2小时。终止反应，并且在使用专有技术检测之前使用0.1％磷酸洗去任何未反应的磷酸盐。该研究一式两份进行，10μM星形孢菌素（一种非选择性ATP竞争性激酶抑制剂）用作阳性对照[1]。

将SKOV3细胞或MCF-7细胞接种于SKOV3增殖测定培养基（补充有5-10％FBS和pen / strep的DMEM）中，密度为5000个细胞，每孔180μL体积，在Costar no。将3610个白色96孔透明平底板在加湿的37℃培养箱中孵育过夜。将标准曲线从10000到50000个细胞设置在单独的板中并使其粘附到板上4-6小时，此时使用Cell Titer-Glo显影该板。第二天早上，在含有1％DMSO的增殖培养基中制备3至10nM的3倍化合物稀释液。然后将20μL每种稀释液加入前一天铺板的SKOV3或MCF-7细胞中，得到1000至4nM的剂量 - 反应曲线。将细胞温育96小时，然后用Cell Titer Glo显色。使用在测定开始时产生的标准曲线测定测定结束时的细胞数。使用以下公式计算生长抑制，并确定GI50值[1]。

小鼠[1]给予雌性nu / nu（n = 3 /组）化合物（GDC-0941或CNX-1351），以100mg / kg腹膜内递送，每天一次，连续5天。在递送最后一剂后，在1,4和24小时时间点收获来自处理动物的脾脏。脾脏立即在液氮中冷冻。将样品储存在-80℃直至处理匀浆。通过向含有300μL细胞提取缓冲液加上完全蛋白酶抑制剂和PhosStop磷酸酶抑制剂的Precellys匀浆管中加入约100μL脾样品制备匀浆物并保持在冰上。将样品在Precellys 24匀浆器中均化15秒，然后在4℃下以16000g离心20分钟。将上清液移至新管中，通过BCA测定法测定蛋白质浓度。

[1]. Nacht M, et al. Discovery of a potent and isoform-selective targeted covalent inhibitor of the lipid kinase PI3Kα. J Med Chem. 2013 Feb 14;56(3):712-21.

3-甲基腺嘌呤 | LY294002 | 渥曼青霉素 | Alpelisib (BYL719) | 5-[2,6-二(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺 | IPI549 | 2-氨基-N-[2,3-二氢-7-甲氧基-8-[3-(4-吗啉基)丙氧基]咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基]-5-嘧啶甲酰胺 | 艾代拉里斯 | Dactolisib (BEZ235) | 槲皮素 | SAR405 | 2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)-1-哌嗪基]甲基]-4-(4-吗啉基)噻吩并[3,2-D]嘧啶 | 740 Y-P | LY3023414 | 1,3-二咖啡酰奎宁酸