描述 |
KRIBB11 是 HSF1 的抑制剂,IC50 值为 1.2 μM。
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相关类别 |
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靶点 |
HSF1:1.2 μM (IC50)
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体外研究 |
KRIBB11阻断HSF1下游靶蛋白如HSP27和HSP70的诱导。 KRIBB11诱导HCT-116细胞的生长停滞和凋亡。 KRIBB11抑制HSF1依赖性p-TEFb(正转录延伸因子b)向hsp70启动子的募集[1]。用KRIBB11处理的细胞中PARP和胱天蛋白酶-3裂解增加。将RKO与KRIBB11一起孵育,显示出约10μM的毒性阈值,并且IC50为20-30μM[2]。
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体内研究 |
KRIBB11(50 mg/kg,ip)导致裸鼠体内肿瘤生长抑制率为47.4%,无体重减轻[1]。
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激酶实验 |
用PBS洗涤HCT-116细胞,然后用结合缓冲液(10mm Tris-HCl(pH 7.4),50mm KCl,5mm MgCl 2,1mm EDTA和0.1mm Na 3 VO 4)中的27号注射器匀浆。将细胞裂解物在4℃以13,000rpm离心30分钟,收集上清液。通过与Dynabeads M-280链霉抗生物素蛋白在4℃温育30分钟来预清洗HCT-116细胞裂解物上清液,并通过磁体分离捕获。将澄清的上清液与生物素-KRIBB11化合物一起温育。在4℃温育过夜后,用Dynabeads M-280链霉抗生物素蛋白沉淀与生物素-KRIBB11化合物相关的蛋白质。沉淀的样品通过磁铁分离。用1mL含有50mm HEPES(pH7.5),50mm NaCl,1mm EDTA,1mm EGTA,0.1%吐温20,10%(v / v)甘油,1mm NaF,0.1mm的离析缓冲液洗涤样品。 Na3VO4和蛋白酶抑制剂混合物片剂(1片/ 10mL)。将样品在SDS-PAGE样品缓冲液中煮沸,用10%聚丙烯酰胺凝胶分离,并用针对HSF1,HSF2,HSP90或CDK9的抗体进行免疫印迹。
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细胞实验 |
在具有10%FBS的McCoy's 5A培养基中,将细胞以每孔6×103个细胞的密度接种到96孔板上。 24小时后,用含有化学品或0.1%DMSO的新鲜完全培养基补充培养基。温育48小时后,将细胞增殖试剂WST-1加入每个孔中。使用ELISA读数器在450nm下测量产生的WST-1甲amount的量。
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动物实验 |
将7周龄雌性近交系无特定病原体的Balb / c裸鼠在无菌条件下饲养,具有12小时光照/黑暗循环,并随意喂食食物和水。为了评估KRIBB11的体内抗肿瘤活性,在第0天将HCT-116细胞(0.3mL的4×107细胞/ mL)皮下植入小鼠的右侧.KRIBB11溶解于10%二甲基乙酰胺中。 ,50%PEG300和40%蒸馏水。当肿瘤大小达到72.2mm 3时,化合物以50mg / kg /天的剂量腹膜内给药18天。通过使用公式长度(mm)×宽度(mm)×高度(mm)/ 2来估计肿瘤体积。为了确定化合物的毒性,记录携带肿瘤的动物的体重。在第18天,处死小鼠,称重肿瘤。
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参考文献 |
[1]. Yoon YJ, et al. KRIBB11 inhibits HSP70 synthesis through inhibition of heat shock factor 1 function by impairing the recruitment of positive transcription elongation factor b to the hsp70 promoter. J Biol Chem. 2011 Jan 21;286(3):1737-47. [2]. Samarasinghe B, et al. Heat shock factor 1 confers resistance to Hsp90 inhibitors through p62/SQSTM1 expression and promotion of autophagic flux. Biochem Pharmacol. 2014 Feb 1;87(3):445-55.
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