AM095

AM095 是一种选择性的 LPA1 受体拮抗剂。作用于人和鼠 转染 LPA1 的 CHO 细胞,AM095 拮抗 LPA 诱导的钙流动,IC50 分别为 0.025 和 0.023 μM。

信号通路 >> G 蛋白偶联受体/G 蛋白 >> LPL受体

研究领域 >> 炎症/免疫

LPA1 receptor[1]

AM095是一种有效的LPA1受体拮抗剂,因为它抑制GTPγS与过表达重组人或小鼠LPA1的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞膜的结合,IC50值分别为0.98和0.73μM。 AM095抑制LPA驱动的过表达小鼠LPA1(IC50 = 778nM)和人A2058黑素瘤细胞(IC50 = 233nM)的CHO细胞的趋化性。 AM095在人LPA1GTPγS结合试验中的IC50与我们之前公布的化合物AM966(IC50 = 0.98±0.17μM)和Debio-0719化合物(IC50 = 0.60±0.04μM)相当[1]。 AM095抑制用人或小鼠LPA1稳定转染的CHO细胞的LPA诱导的钙通量。 AM095拮抗LPA诱导的人或小鼠LPA1转染的CHO细胞的钙通量的IC50分别为0.025和0.023μM[2]。

AM095具有高口服生物利用度和中等半衰期,并且在口服和静脉内给药后在大鼠和狗中测试的剂量下具有良好的耐受性。在大鼠口服(10mg/kg)给药后,AM095血浆浓度在2小时达到峰值,Cmax为41μM,之后在24小时内降至10nM。在静脉内(2mg/kg)给药后,在15分钟内观察到12μM的Cmax,其在24小时内也降低至约10nM,产生1.79h的t1/2。在狗中,单次口服剂量为5mg/kg,在给药15分钟内产生21μM的峰值血浆浓度,然后在24小时内降至10nM。相比之下,2 mg/kg的静脉注射剂量在15分钟内导致Cmax为11μM,8小时后降至15 nM,产生的t1/2为1.5 h [1]。

将已知量的AM095（在DMSO中稀释）或载体（DMSO）加入25至40μg的hLPA1 / CHO或mLPA1 / CHO膜和0.1nM [35S]-GTPγS的缓冲液（50mM HEPES，0.1mM NaCl，10）中。含有0.2％不含脂肪酸的人血清白蛋白和5μMGDP的mMMgCl2,50μg/ mL皂苷，pH7.5）。为了测试LPA1拮抗剂活性，测量AM095抑制由900nM LPA（18：1）刺激的GTPγS结合的能力。或者，为了测试激动剂作用，测量AM095在不存在LPA的情况下刺激GTPγS结合的能力。将反应物在30℃温育30分钟，然后将膜收集到玻璃滤膜结合板（UniFilter GF / B）上，并用含有50mM HEPES，pH 7.4,100mM NaCl，10mM MgCl 2的冷缓冲液用Brandel洗涤三次。 96针细胞收集器。将板干燥，然后使用Packard TopCount NXT微孔板闪烁计数器[1]评估cpm。

大鼠[1]使用手术植入的颈静脉导管（250-300g）的雄性Sprague-Dawley大鼠。在所有研究中，动物在给药前禁食15至24小时。对于大鼠，AM095以2mg / kg的剂量静脉内施用于0.9％盐水中，以1mL / kg推注注入颈静脉。为了确定口服暴露，AM095以0.5％甲基纤维素的溶液形式通过口服管饲法以10mg / kg的剂量以3mL / kg的体积给药。在EDTA钾管中，在给药后24小时（每只动物10-11个样品）的时间通过颈静脉导管从每只大鼠取血样（约300μL总血液）。每次取样后，用等体积的盐水冲洗导管。通过离心全血制备的血浆样品在分析前冷冻（-80℃）储存。 AM095以2mg / kg静脉内给药并以5mg / kg口服给予雄性比格犬（n = 3）。收集血浆样品并通过液相色谱/质谱分析AM095浓度。在0和4小时，通过口服管饲法（30mg / kg）给小鼠[2] C57Bl / 6小鼠施用选择性LPA1拮抗剂AM095，并且在0,4,8，在EDTA钠管麻醉下通过心脏穿刺收集血液。 ，9,12和24小时。在通过液相色谱/质谱（LC-MS / MS）分析AM095浓度之前，将血浆样品储存在-40℃。将已知量的AM095加入到解冻的小鼠血浆中以产生0.8至4,000ng / mL的浓度范围。使用含有内标丁螺环酮的乙腈沉淀血浆样品。使用Leap PAL自动进样器注射分析物混合物（10μL）。通过绘制分析的峰的峰面积比与已知浓度的关系来构建校准曲线。定量下限为1 ng / mL。使用1 / x2加权对数据进行线性回归分析。使用WinNonlin Professional通过非区室分析计算AM095的药代动力学参数。 Cmax和到Cmax的时间（Tmax）直接从测量数据获得。

[1]. Swaney JS, et al. Pharmacokinetic and pharmacodynamic characterization of an oral lysophosphatidic acid type 1 receptor-selective antagonist. J Pharmacol Exp Ther. 2011 Mar;336(3):693-700.

[2]. Castelino FV, et al. Amelioration of dermal fibrosis by genetic deletion or pharmacologic antagonism of lysophosphatidic acid receptor 1 in a mouse model of scleroderma. Arthritis Rheum. 2011 May;63(5):1405-15.

Ki 16425 | 辛波莫德 | 4'-[4-[[[(1R)-1-(2-氯苯基)乙氧基]羰基]氨基]-3-甲基-5-异恶唑基]-联苯-4-乙酸 | 奥扎莫德 | BMS-986020 | LPA2拮抗剂1 | TY-52156 | [4'-[3-甲基-4-[[[((R)-1-苯基乙基)氧基]羰基]氨基]异恶唑-5-基]联苯-4-基]乙酸 | Etrasimod | Cenerimod | Ponesimod | MT-1303盐酸盐 | S1p受体激动剂1 | ONO-7300243