4'-[4-[[[(1R)-1-(2-氯苯基)乙氧基]羰基]氨基]-3-甲基-5-异恶唑基]-联苯-4-乙酸

AM966 是一种高亲和性的选择性LPA1-拮抗剂,抑制LPA-刺激的细胞内钙释放,IC50 为 17 nM。

信号通路 >> G 蛋白偶联受体/G 蛋白 >> LPL受体

研究领域 >> 炎症/免疫

LPA1[1]

AM966是一种有效的,选择性的,口服生物可利用的LPA1受体拮抗剂。 AM966抑制LPA1介导的人A2058黑色素瘤细胞趋化性(IC50 = 138±43 nM),IMR-90人肺成纤维细胞(IC50 = 182±86 nM)和CHO mLPA1细胞(IC50 = 469±54 nM)[1]。 LPA诱导的ERK1/2激活完全被AM966(100nM)阻断,其相对于LPA2-5选择性地拮抗LPA1,IC50值为3.8±0.4nM。用AM966(100 nM)预处理完全阻断由阿米替林或米安色林诱导的ERK1/2磷酸化[2]。

AM966(30 mg/kg,BID)可在3天的博来霉素模型中减少血管渗漏,炎症和肺损伤以及炎症。在博莱霉素肺损伤后14天,AM966抑制肺纤维化,维持小鼠体重并减少肺部炎症。在14天的博来霉素研究中,AM966减少了血管渗漏,组织损伤和促纤维化细胞因子的产生。与14天博来霉素模型中的吡非尼酮相比,AM966表现出更高的功效。 AM966在博来霉素损伤后的晚期时间点降低死亡率和纤维化[1]。

CHO-K1细胞在12孔板中生长至80％汇合，血清饥饿24小时，并在具有AM966的无血清培养基中温育。 21小时后，加入[3H]胸苷（0.5μCi/孔）并继续培养3小时。然后除去培养基，将细胞置于冰上，用1mL含有5％三氯乙酸的冰冷PBS洗涤两次。将细胞溶解并通过液体闪烁计数测定[3H]胸苷掺入。分析一式三份进行[2]。

小鼠[1]在禁食小鼠中测定AM966的口服暴露。动物通过口服强饲法在载体（水）中接受AM966（10mg / kg），然后在给药后1,2,4,8和24小时通过CO 2吸入杀死（每个测试化合物每个时间点n = 2只动物） 。通过心脏穿刺将血液（约300μL）收集到含EDTA的管中，并以1450×g离心10分钟。除去血浆并通过液相色谱 - 质谱（LCMS）分析AM966含量。简言之，将已知量的AM966加入到解冻的小鼠血浆中以产生0.8至4000ng / mL的浓度范围。使用含有内标丁螺环酮的乙腈（1：4，v：v）沉淀小鼠血浆样品。使用Leap PAL自动进样器注射10μL等分试样的分析物混合物。使用与具有SCL-10A VP系统控制器的Shimadzu LC-10AD VP连接的Agilent Zorbax SB-C8柱（2.1×50mm;5μm）进行分析。通过多反应监测在PE Sciex API3200上以正离子模式（ESI）进行串联质谱检测。通过绘制分析的峰的峰面积比与已知浓度的关系来构建校准曲线。定量下限为0.8 ng / mL。数据经过1 / x2加权的线性回归分析。

[1]. Swaney, JS, et al. A novel, orally active LPA1 receptor antagonist inhibits lung fibrosis in the mouse bleomycin model. Br J Pharmacol. 2010 Aug;160(7):1699-713.

[2]. Olianas MC, et al. Antidepressants activate the lysophosphatidic acid receptor LPA(1) to induce insulin-like growth factor-I receptor transactivation, stimulation of ERK1/2 signaling and cell proliferation in CHO-K1 fibroblasts. Biochem Pharmacol. 2015 Jun 15;95(4):311-23.

Ki 16425 | 辛波莫德 | 奥扎莫德 | BMS-986020 | LPA2拮抗剂1 | TY-52156 | AM095 | Etrasimod | Cenerimod | Ponesimod | MT-1303盐酸盐 | S1p受体激动剂1 | ONO-7300243 | FTY720(S)-磷酸盐