描述 |
Recilisib 是一种辐射防护剂,可以激活细胞中 AKT 和 PI3K 的活性。
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相关类别 |
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靶点 |
Akt
PI3K
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体外研究 |
Recilisib钠(高达50μM)在整个细胞周期中显示正常的细胞分布,在50μM时S期细胞数量略有减少。 Recilisib钠(100μM)的连续暴露不会导致细胞死亡。 Recilisib钠不会抑制人骨髓在任何时间点在甲基纤维素中形成集落的能力。 Recilisib钠处理不会抑制人骨髓细胞的集落形成潜力。 Recilisib钠在所有三种IR剂量下均提供人骨髓细胞的剂量依赖性保护。 Recilisib钠激活HFL细胞中AKT和GSK3α/β的磷酸化。 Recilisib钠增加HFL-1细胞和小鼠骨髓细胞中PI3K活性以响应辐射暴露。 Recilisib钠联合放射治疗可改变MAPK信号通路[1]。
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体内研究 |
Recilisib钠(500 mg/kg)显着提高小鼠原始骨髓髓系祖细胞的恢复和分化率。 Recilisib钠与辐射相结合可减少小鼠的CFU数量,但Recilisib钠处理的小鼠始终保持形成分化集落的能力。 Recilisib钠处理的小鼠有一个祖先细胞群,从未完全耗尽辐射[1]。
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激酶实验 |
使用指数生长的HFL-1或新鲜收获的鼠骨髓细胞进行PI3-激酶测定,所述鼠骨髓细胞用递增浓度的Recilisib钠处理2小时,然后用10Gy IR照射。然后将这些细胞返回培养箱2至24小时,并在HEPES pH 7.5裂解缓冲液中裂解。使用抗PI3 Kinas多克隆抗体在4℃下免疫沉淀PI-3K 2小时。将蛋白A / G PLUS-琼脂糖与免疫沉淀物在4℃下孵育8-16小时,得到的免疫沉淀物用两次HEPES pH 7.5裂解缓冲液洗涤一次,用激酶缓冲液(20mM Tris pH7.5,1mM EGTA,10mM MgCl2)洗涤一次。 ,2mM DTT,0.01%NP-40)。将L-α-磷脂酰肌醇(12.5mM)和ATP(10μM)加入到激酶缓冲液(每个样品60μL)中并在30℃下孵育30分钟。加入100μL1NHCl终止反应,加入200μLCHCl3/ CH3OH(1:1)萃取。将提取的样品涡旋,离心,并将含有磷脂的下部有机相在27℃下干燥2小时。将干燥的样品重悬于10μLPI-4-P标准品(0.5mL CHCl 3,0.5mL CH 3 OH,2.5μLHCl)中并点样在TLC板(VWR)上。将点样的板在CHCl 3 / CH 3 OH / NH 4 OH(40:40:15)中进行薄层层析。将TLC板干燥并进行放射自显影。
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细胞实验 |
对于细胞毒性测定,用不同浓度的Recilisib钠或载体处理细胞(1.0×10 5细胞/ mL HPGM),无需放射治疗2或24小时。洗涤细胞并使用网格培养皿接种到methocult中。通过使用Olympus IMT-2显微镜的显微镜观察,在平板接种后14天测定菌落形成单位(CFU)的总数。
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参考文献 |
[1]. Kang AD, et al. ON01210.Na (Ex-RAD) mitigates radiation damage through activation of the AKT pathway. PLoS One. 2013;8(3):e58355.
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