| 描述 |
SCH 546738 是一种有效的非竞争性 CXCR3 拮抗剂,结合到人 CXCR3 受体的亲和常数 (Ki) 为 0.4 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
Human CXCR3:0.4 nM (Ki)
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| 体外研究 |
SCH 546738与人CXCR3受体结合的亲和力通过使用35S放射性标记的SCH 535390(CXCR3化合物系列的磺酰胺类似物,Kd为0.6nM)作为竞争性示踪剂的竞争结合分析来确定。此外,SCH 546738以非竞争性方式取代来自人CXCR3的放射性标记的CXCL10和CXCL11,IC50范围为0.8至2.2nM。 SCH 546738有效且特异性地抑制人活化T细胞中CXCR3介导的趋化性,IC90约10nM。 SCH 546738对人CXCL10和CXCL11与人CXCR3结合的竞争在受体的Kd(50-100pM)附近的各种浓度的[125 I] hCXCL10和[125 I] hCXCL11下测定。 SCH 546738的IC 50是恒定的(~1或2 nM),并且分别与[125 I] hCXCL10(25-500 pM)或[125 I] hCXCL11(12.5-250 pM)的输入浓度无关[1]。
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| 体内研究 |
SCH 546738具有强的跨物种活性,IC50分别为1.3nM,6.4nM,5.9nM和4.2nM,分别抑制[125I] hCXCL10与猴,狗,小鼠和大鼠来源的CXCR3的结合。 SCH 546738是一种选择性和有效的CXCR3拮抗剂,具有良好的PK用于体内研究。此外,SCH 546738在啮齿动物中具有有利的药代动力学特征,在给药后24小时内Lewis大鼠和C57BL/6小鼠中SCH 546738的血浆浓度。 AUC(0-24小时)在Lewis大鼠10mg/kg(mpk)中为7.7μM.hr,在C57BL/6小鼠30mpk中为12.6μM.hr[1]。
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| 激酶实验 |
闪烁亲近测定法用于放射性配体竞争结合测定，并进行一些修改。对于每个测定点，将1μg膜与结合缓冲液中的300μg小麦胚芽凝集素（WGA）包被的SPA珠预孵育1小时（50mM HEPES，1mM CaCl 2,5mM MgCl 2,125mM NaCl，0.002％NaN 3） ，1.0％BSA）在室温下。将珠子旋转沉淀，重悬于结合缓冲液中并转移到96孔Isoplate中。加入指示浓度的125 I-hCXCL10,125I-hCXCL11或35S-SCH 535390以及一系列SCH 546738滴定（1-10μM）以开始反应。在室温下指示反应时间后，用Wallac 1450 Microbeta计数器[1]测定与SPA珠结合的放射性量。
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| 细胞实验 |
进行人活化T细胞的制备。通过Ficoll-Hypaque离心制备人外周血淋巴细胞，耗尽单核细胞，并在补充有10％胎牛血清（FBS）的RPMI 1640中用1μg/ mL PHA和100U / mL IL-2刺激2天，2 mM L-谷氨酰胺，100μg/ mL链霉素，100U / mL Penecillin，1％非必需氨基酸和2mM HEPES。刺激后，将外周血淋巴细胞在含有5％条件培养基的上述培养基中培养长达15天。使用具有3μm过滤器的96孔ChemoTx微孔板进行uman活化的T细胞趋化性测定。用RPMI培养基洗涤活化的T细胞两次，然后重悬于含有20％FBS的培养基中。将1.25×10 5个细胞/反应物与指定浓度的SCH 546738（1,10或100nM）混合并置于过滤器上。将SCH 546738和趋化因子混合并置于ChemoTx系统的底部孔中。在37℃/ 5％CO 2下孵育2.5小时后，刮下细胞并将板系统以1000RPM离心5分钟。然后移除滤网，将ChemoTx板倒置到带有漏斗板的96孔板中。将板系统以1000RPM离心5分钟。用测定缓冲液将孔中的体积调至100μL，并将板在室温下静置约15分钟。使用Cell Titer Glo发光测定法测量迁移细胞的数量。趋化性表达为趋化指数，与没有趋化因子的趋势指数相比[1]
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| 动物实验 |
小鼠[1]使用雌性C57BL / 6小鼠。对于免疫，将普林斯顿生物分子制备的150μgMOG35-55肽和300μg杀死的结核分枝杆菌在CFA中混合，并在第1天在两侧50-μL注射皮下注射sc。另外，静脉内注射200ng百日咳毒素第5天和第2天。在54天，每天两次在C57BL / 6小鼠中口服施用30mpk。用SCH 546738给药在MOG35-55免疫（第1天）前第24天开始。每天监测小鼠并根据以下标准以盲法评估疾病的临床症状：0，没有疾病迹象; 1，尾巴麻痹; 2，跛尾和后肢无力; 3，后肢瘫痪; 4，后肢加前肢麻痹; 5，垂死或死亡。通过添加从免疫当天到实验结束的每日分数来计算累积临床评分。通过将各个小鼠的评分相加并除以每组中的小鼠数，包括未发生EAE征象的小鼠，计算在不同日期的平均临床评分和平均最大评分。大鼠[1]雄性Lewis大鼠通过将完全弗氏佐剂（CFA）中的50μL（30mg）豚鼠脊髓匀浆注射到一个足垫中来攻击。从移植前一天开始直至移植物排斥当天，以指定剂量（0.2mL）口服给予SCH 546738或0.4％甲基纤维素（载体）两次，每天两次。 SCH 546738以10mg / kg（mpk）口服给予Lewis大鼠。为了测试SCH 546738是否增强常规免疫抑制试剂的效果，接受者接受亚治疗剂量的CsA治疗一周与SCH 546738治疗相结合。使用对数秩检验分析移植物存活。使用GraphPad InStat版本通过Student t test（双尾）分析参数数据。
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| 参考文献 |
[1]. Jenh CH, et al. A selective and potent CXCR3 antagonist SCH 546738 attenuates the development of autoimmune diseases and delays graft rejection. BMC Immunol. 2012 Jan 10;13:2. [2]. Zhang X, et al. CXC chemokine receptor 3 promotes steatohepatitis in mice through mediating inflammatory cytokines, macrophages and autophagy. J Hepatol. 2016 Jan;64(1):160-70. [3]. Yue C, et al. STAT3 in CD8+ T Cells Inhibits Their Tumor Accumulation by Downregulating CXCR3/CXCL10 Axis. Cancer Immunol Res. 2015 Aug;3(8):864-870.
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