E7449

E7449用途

E7449 是 PARP1 和 PARP2 的有效抑制剂，同时可抑制 TNKS1 和 TNKS2 的活性，在以 ³²P-NAD⁺ 为底物的实验中，测得对 PARP1，PARP2，TNKS1 和 TNKS2 的 IC₅₀ 值分别为 2.0，1.0，∼50 和 ∼50 nM。

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E7449名称

[ CAS 号 ]:
1140964-99-3

[ 中文名 ]:
E7449

[ 英文名 ]:
E-7449

[英文别名 ]:

E-7449
E7449

E7449生物活性

[ 描述 ]:

E7449 是 PARP1 和 PARP2 的有效抑制剂,同时可抑制 TNKS1 和 TNKS2 的活性,在以 32P-NAD+ 为底物的实验中,测得对 PARP1,PARP2,TNKS1 和 TNKS2 的 IC50 值分别为 2.0,1.0,∼50 和 ∼50 nM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> PARP

信号通路 >> 表观遗传学 >> PARP

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

PARP2:1 nM (IC50)

PARP1:2 nM (IC50)

TNKS1:50 nM (IC50)

TNKS2:50 nM (IC50)

[体外研究]

E7449是一种有效的PARP1和PARP2抑制剂,并且还抑制TNKS1和TNKS2,使用32P-NAD +作为底物,PARP1,PARP2,TNKS1和TNKS2的IC50分别为2.0,1.0,~50和~50nM。 E7449对PARP3或PARP 6-16没有明显的抑制作用。 E7449将PARP1捕获到受损的DNA上,并影响超出同源重组(HR)的DNA修复途径。 E7449最常见的抑制HR途径成分缺陷的细胞(BRCA1和2,CtIP,Rad54)。 E7449(10μM)抑制SW480细胞中的Wnt信号传导[1]。

[体内研究]

E7449在100mg/kg中适度抑制肿瘤的生长,并且在小鼠黑色素瘤B16-F10同种异体移植模型中通过10,30和100mg/kg口服给药与替莫唑胺(TMZ)组合显着增强抑制作用。 E7449(30或100mg/kg,口服)抑制PARP,显示出抗肿瘤活性,并且在BRCA突变异种移植模型中没有任何明显的体重减轻或死亡的情况下耐受良好。 E7449(30,100或300mg/kg,po)以剂量依赖性方式抑制毛发的再生长,并阻断C57BL/6小鼠中的Wnt信号传导。 E7449(100mg/kg,口服)与MEK抑制剂组合在Wnt1皮下模型(最初从Wnt1(int-1)转基因小鼠中分离的乳腺肿瘤)中显示出抗肿瘤活性[1]。

[激酶实验]

简言之，转染后24至48小时，将细胞在冰冷的PBS中洗涤3次，并在冰上在细胞裂解缓冲液中裂解20分钟（CLB：50mM HEPES，pH 7.4,150mM NaCl，1mM MgCl 2,1mM EGTA，1mM DTT，1％TritonX-100,1μg/ mL亮肽素，抑肽酶，胃蛋白酶抑制剂，PMSF）。将裂解物以100,000g超速离心30分钟。将清除的裂解物在4℃下与抗GFP抗体（3E6）和预结合的蛋白A磁珠一起温育1小时。然后在CLB中洗涤珠子1×5分钟，然后在含有1M NaCl的CLB中洗涤3×10分钟，并在PARP反应缓冲液（PRB; 50mM Tris，pH 7.5,50mM NaCl，0.5）中洗涤1×5分钟。 mM DTT，0.1％TritonX-100,1μg/ mL亮肽素，抑肽酶，胃蛋白酶抑制剂）。 NAD +掺入反应在含有10μMNAD+的PRB中以1:20的比例补充32P-NAD +，在25℃下进行30分钟。对于具有低掺入信号（PARP4,5a和16）的PARP，NAD +掺入以1：5的比例在25℃下进行1小时。然后将珠子重新悬浮在Laemmli样品缓冲液中，加热至65℃10分钟，用磁铁除去珠子，并将上清液点在Whatman纸上。通过磷光成像分析样品[1]。

[细胞实验]

在一组32个同基因DT40细胞系中进行增殖测定，其中每个系缺乏不同的DNA修复基因。接种细胞并与各种浓度的测试化合物一起孵育2-3天（~8个细胞周期）。使用XTT评估细胞生长，并使用GraphPad Prism 5软件版本5.02计算IC 50值。每个实验一式两份进行，并进行至少3次单独的实验。人乳腺癌细胞系，HCC1143，HCC70，HCC1806，MDA-MB-436，T47D，MDA-MB-157，MDA-MB-231，MDA-MB-468，MDA-MB-453，BT-20和Hs578T是用过的。对于细胞系组测定，维持细胞并在含有10％FBS的RPMI 1640或DMEM培养基中进行测定。对于增殖测定，将细胞以低密度接种在96孔板中。以各种浓度加入E7449，并将板孵育总共8天;在第4天补充化合物和培养基。使用CellTiter-Glo细胞活力测定评估细胞生长。每个实验一式两份进行，并且至少进行3次单独的实验[1]。

[动物实验]

B16-F10同种异体移植模型中的替莫唑胺（TMZ）组合：用B16-F10细胞（2×105）皮下接种雌性C57BL / 6小鼠。在通过体重随机化后，在接种后1天开始药物治疗。 E7449和TMZ均采用0.5％甲基纤维素配制，每天口服一次。在第1至5天每天以50mg / kg作为单一药剂或组合施用TMZ。 E7449在第1天至第7天每天以10,30和100mg / kg的剂量与TMZ组合施用，并以100mg / kg的剂量作为单一药剂施用。对照组用载体（0.5％甲基纤维素水溶液）处理。首先施用E7449或载体，并且当所有动物的给药完成时，将TMZ给予接受组合的动物[1]。

[参考文献]

[1]. McGonigle S, et al. E7449: A dual inhibitor of PARP1/2 and tankyrase1/2 inhibits growth of DNA repair deficient tumors and antagonizes Wnt signaling. Oncotarget. 2015 Dec 1;6(38):41307-23.

[相关活性小分子]

E7449物理化学性质

[ 密度 ]:
1.4±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
381.4±34.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₁₈H₁₅N₅O

[ 分子量 ]:
317.345

[ 闪点 ]:
184.5±25.7 °C

[ 精确质量 ]:
317.127655

[ LogP ]:
1.12

[ 外观性状 ]:
粉末

[ 蒸汽压 ]:
0.0±0.9 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.731

[ 储存条件 ]:
-20℃

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