组氨素5

Histatin 5 抑制宿主基质金属蛋白酶 MMP-2 和 MMP-9 活性, IC50 分别为 0.57 和 0.25 μM。

研究领域 >> 炎症/免疫

多肽产品

IC50: 0.57 μM (MMP-2), 0.25 μM (MMP-9)[1]

组蛋白5是由腮腺,颌下腺和舌下腺分泌的低分子量唾液蛋白家族的成员。使用生物素化明胶作为底物,发现组蛋白5抑制宿主基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性,IC50分别为0.57和0.25μM。为了定位负责该抑制的结构域,合成含有组氨酸5的不同区域的三种肽并作为MMP-9的抑制剂进行测试。包含组蛋白5的残基1至14和残基4至15的肽显示出低得多的抑制活性(分别为IC 50,21.4和20.5μM),而包含残基9至22的肽显示与组蛋白5相对于MMP-9的相同活性。对Arg-gingipain抑制的动力学分析表明,Histatin 5是一种竞争性抑制剂,仅影响Km,Ki为15μM[1]。组蛋白5是线粒体呼吸的抑制剂。人唾液抗真菌肽Histatin 5被白色念珠菌细胞摄取并在细胞内与线粒体结合。组蛋白5以剂量和时间依赖性方式抑制分离的白色念珠菌线粒体的呼吸以及完整的胚芽孢的呼吸。浓度为33uM的组氨素5抑制状态2呼吸[2]。

使用生物素化的明胶包被的微量滴定板作为底物测试MMP-2和MMP-9。在该测定中，酶活性的估计基于结合的生物素的损失，所述生物素由对吸附在微量滴定板孔中的明胶 - 生物素复合物的蛋白水解活性产生。将5.4μMMMP-9的储备溶液在由含有0.5M NaCl和5mM CaCl 2的50mM Tris-HCl（pH 7.5）组成的酶缓冲液中稀释至10.8nM。通过加入1mM 4-氨基苯基汞乙酸盐活化稀释的酶，并在室温下进一步温育30分钟。将浓度范围为0.005至100μM的组蛋白5与活化酶一起温育10分钟，然后加入微量滴定板中。用肽1，肽2和肽3进行相同的操作。作为阳性对照，EDTA以25mM使用。在将适当的抑制剂与酶温育后，用50μL该混合物填充微量滴定板的孔，并将板在37℃下孵育2小时。含有不含抑制剂的酶的孔用于确定最大活性（100％）。仅含有底物和缓冲液的孔用作对照，表示无活性（0％）。为了终止反应，将板用200μL含有1％吐温20的PBS洗涤三次。随后，向每个孔中加入50μL链霉抗生物素蛋白 - 碱性磷酸酶（在水中1：2,500稀释），并且在37℃下孵育15分钟。然后将板用200μLPBS-Tween洗涤四次，并在37℃下加入200μL溶于二乙醇胺缓冲液（1mg pNPP / mL缓冲液）中的pNPP 20分钟。使用微量滴定板读数器[1]记录405nm处的吸光度。

[1]. Gusman H, et al. Salivary histatin 5 is an inhibitor of both host and bacterial enzymes implicated in periodontaldisease. Infect Immun. 2001 Mar;69(3):1402-8.

[2]. Helmerhorst EJ, et al. The human salivary peptide histatin 5 exerts its antifungal activity through the formation ofreactive oxygen species. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001 Dec 4;98(25):14637-42.

伊洛马司他 | T-5224 | SB-3CT | 巴马司他 | 黄芪甲苷IV | 马立马司他 | 依达拉奉 | TAPI-2 | TAPI-1 | 异银杏双黄酮 | 牛蒡子苷元 | 4-[[[4-(4-氯苯氧基)苯基]磺酰基]甲基]四氢-n-羟基-2H-吡喃-4-羧酰胺 | GI254023X | JNJ0966 | CL-82198