K-756

K-756 是一种直接的选择性 tankyrase (TNKS) 抑制剂,抑制 TNKS1 和 TNKS2 的 ADP-核糖基化活性,IC50 分别为 31 和 36 nM。

研究领域 >> 癌症

TNKS1:31 nM (IC50)

TNKS2:36 nM (IC50)

K-756是一种新型选择性Wnt /β-连环蛋白途径抑制剂,靶向端锚聚合酶(TNKS)。 TNKS是PARP家族的成员之一(也称为PARP5)。 K-756与诱导的TNKS袋结合并抑制其酶活性。为了研究K-756的同种型选择性,评估了10μM的PARP家族酶抑制活性。 K-756分别抑制TNKS1和TNKS2 97％和100％。相反,K-756对PARP1,PARP2,PARP3,PARP6,PARP7和PARP11的抑制活性小于13％。 K-756通过抑制Wnt /β-连环蛋白途径抑制APC突变结肠直肠癌COLO 320DM和SW403细胞的细胞生长。 K-756强烈抑制DLD-1/TCF-Luc细胞中的报道活性,IC50为110nM,但即使在1,000nM下也不抑制DLD-1/mtTCF-Luc细胞。用K-756处理APC突变体结肠直肠癌细胞系COLO 320DM和SW403细胞,144小时后,通过XTT测定法测量细胞生长抑制。 K-756的应用抑制COLO 320DM的细胞生长,GI50为780nM。 K-756还抑制SW403,GI50为270 nM [1]。

在SCID小鼠中产生DLD-1/TCF-Luc细胞异种移植物。载体(0.5％MC400)或K-756以100,200和400mg/kg每天一次口服给药3天。通过测量FGF20和LGR5以及荧光素酶活性来检测肿瘤中的Wnt /β-连环蛋白信号抑制。在施用3天时,在100mg/kg及以上的剂量下,FGF20和报道活性的表达显着降低。在给药3天时,在200mg/kg及以上的剂量下LGR5的表达显着降低。在施用3天时以400mg/kg的剂量施用K-756达到最大抑制活性。从给药1天开始观察到剂量为400mg/kg的Wnt /β-连环蛋白信号抑制[1]。

使用PARP1，PARP2，PARP3，PARP6，PARP7和PARP11化学发光测定试剂盒以及TNKS1和TNKS2组蛋白核糖基化测定试剂盒测量每种酶的活性。酶促反应在含有测定缓冲液，酶包被的平板和底物的50μL混合物中在30℃下一式两份进行1小时。在酶促反应后，向每个孔中加入50μL链霉抗生物素蛋白-HRP，并将板在室温下再温育30分钟。将100μL显色剂试剂加入孔中，并使用Synergy2酶标仪测量发光。使用GraphPad Prism软件程序[1]分析发光数据。

对于细胞活力测定，将APC-突变体结肠直肠癌细胞系COLO 320DM和SW403细胞接种在96孔白色平板中。通过RNAiMax逆转染siRNA。 144小时后，使用Cell Titer-Glo发光细胞活力测定试剂盒进行细胞活力测定。使用Top count NXT系统测量荧光素酶活性。对于细胞生长抑制测定，将细胞接种在96孔板中。第二天，用化合物（例如，K-756,0.1nM，1nM，10nM，100nM，1μM和10μM）处理细胞。孵育0,72或144小时后，将XTT试剂加入细胞中。孵育3小时后，使用SpectraMax 340PC系统[1]测量从四唑盐XTT形成甲dye染料。

将小鼠[1] SCID小鼠（CB17 / Icr-Prkdcscid / CrlCrlj，雄性，5周龄）皮下植入5×10 6个细胞的DLD-1 / TCF-Luc细胞。 13天后，将肿瘤体积为236.38-595.80mm 3的小鼠分成5只动物的组。在分组后第二天，每天一次口服给予小鼠0.5％MC 400或K-756（100,200和400mg / kg），持续3天。在第一天和第二天的最后一次给药后二十四小时和第三天的最后一次给药后25小时，从小鼠收集肿瘤组织并在液氮中冷冻。使用RNeasy mini试剂盒提取肿瘤总RNA，并使用VILO试剂进行逆转录。进行RT-PCR。

[1]. Okada-Iwasaki R, et al. The Discovery and Characterization of K-756, a Novel Wnt/β-Catenin Pathway Inhibitor Targeting Tankyrase. Mol Cancer Ther. 2016 Jul;15(7):1525-34.

他拉唑帕利 | XAV-939 | 尼拉帕尼 | 维利帕尼 | 瑞卡帕布磷酸盐 | PJ34盐酸盐 | Pamiparib | Rucaparib Camsylate | E7449 | 4-[4-氟-3-[(4-甲氧基哌啶-1-基)羰基]苄基]酞嗪-1(2H)-酮 | G007-LK | 4-碘-3-硝基-苯甲酰胺 | 2-[1-(4,4-二氟环己基)-4-哌啶基]-6-氟-2,3-二氢-3-氧代-1H-异吲哚-4-甲酰胺 | 2-[2-氟-4-[(2S)-2-吡咯烷基]苯基]-1H-苯并咪唑-7-甲酰胺 | AG 14361