PDD 00017273

PDD 00017273 是一种有效的聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶 (PARG) 抑制剂,IC50 值为 26 nM,KD 值为 1.45 nM。

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IC50: 26 nM (PARG)[1] KD: 1.45 nM (PARG)[1]

PDD 00017273是PARG的有效抑制剂,IC50为26 nM,KD为1.45 nM。 PDD 00017273(10μM)不抑制五种常见的细胞色素P450酶。 PDD 00017273(30μM)适度增加磷酸化H2AX(γH2AX)强度,PDD 00017273在DNA损伤后通过PARG抑制也降低NAD/H. PDD 00017273抑制携带BRCA1和BRCA2野生型的ZR-75-1细胞,并且对抗MDA-MB-436细胞的活性较低,携带BRCA1中的5396 + 1G> A突变[1]。 PDD 00017273(0.3μM)抑制MCF7细胞中PAR聚合物的降解。 PDD 00017273(0.3μM)也降低了BRCA1,BRCA2,PALB2,FAM175A和BARD1耗尽细胞的活力。 PDD 00017273停止复制分叉并诱导DNA损伤,需要同源重组(HR)进行修复[2]。

简而言之，PARG体外测定以标准384孔格式的总体积15μL进行。将最终反应浓度为65 pM的总共5μL人全长PARG加入到5μLBt-NAD核糖基化PARP1底物中，最终反应浓度为4.8 nM，在测定缓冲液（50 mM Tris pH 7.4中， 0.1mg / mL BSA，3mM EDTA，0.4mM EGTA，1mM DTT，0.01％吐温20,50mM KCl）。将反应物在室温下孵育10分钟，然后加入5μL检测试剂。检测试剂由42 nM mAb抗6HIS XL665和2.25 nM链霉抗生物素蛋白铕密码组成，两者均在检测缓冲液（50 mM Tris pH 7.4,0.1 mg）中，3倍工作原液浓度（终浓度分别为14 nM和0.75 nM） / mL BSA和100mM KF）。在室温下在黑暗中孵育60分钟后，使用PHERAstar FS读板仪在λEx340nm和λEm665nm和λEm620nm下测量TR-FRET信号。对于每个孔，该比率计算为[Em665 / EM620]×104，并用于计算测试化合物的抑制百分比[1]。

将HeLa细胞以1×10 4细胞/ mL接种于Greiner 384孔板中的30μL培养基中。总共16-24小时后，用抑制剂（8ppt剂量反应，0.01-30μM，一式三份）或媒介物（DMSO）对照处理细胞。为了解决边缘效应，外部井保持未开口状态。 72小时后，向每个孔中加入50μL的3.7％甲醛/ PBS，并将细胞固定20分钟。然后用PBS冲洗细胞两次，并在黑暗中用Hoechst 33342 / PBS（1：2000）染色1小时。在用PBS进一步漂洗两次后，捕获图像并在CellInsight上计数细胞核。从每个三个孔中捕获最大数量的场，其在载体剂量的井中近似至少1000个核[1]。

[1]. James DI, et al. First-in-Class Chemical Probes against Poly(ADP-ribose) Glycohydrolase (PARG) Inhibit DNA Repair with Differential Pharmacology to Olaparib. ACS Chem Biol. 2016 Nov 18;11(11):3179-3190. Epub 2016 Oct 12.

[2]. Gravells P, et al. Specific killing of DNA damage-response deficient cells with inhibitors of poly(ADP-ribose) glycohydrolase. DNA Repair (Amst). 2017 Apr;52:81-91.

磺丁基-β-环糊精钠盐 | 环孢霉素A | 2-(3,6-二乙酰氧基-2,7-二氯-9H-氧杂蒽-9-基)苯甲酸 | 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐 | GW4869 | 乙莫克舍 | (2R,2'R,3R,3'R,4S,4'S,5R,5'R,6S,6'S)-6,6'-硫代双(4-(4-(3-氟苯基)-1H-1,-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇) | Mitoquinone甲磺酸盐 | GSK2795039 | CBIC2 | BAPTA-AM | AP20187 | GKT137831 | D-(-)-荧光素 | 单响尾蛇毒蛋白