AX20017

AX20017是蛋白激酶G (PknG) 的小分子抑制剂,IC50 值为 0.39 μM。

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IC50: 0.39 μM (PknG)[1]

化合物AX20017抑制剂深深地结合在由PknG结构域的叶间裂隙形成的狭窄口袋内。 PknG的主链Glu233：O和Val235：NH与AX20017形成氢键[2] .AX20017导致分枝杆菌转移至溶酶体并杀死分枝杆菌。 AX20017不影响人类激酶,而PknG的活性被有效抑制。 AX20017不影响细胞形态,膜皱褶或巨胞饮作用[3]。

在不存在或存在试剂的情况下，PknG（0.5μg）的体外磷酸化在25mM Tris（pH 7.5），2mM MnCl 2和0.5μCi[γ-32P] ATP中。为了监测PknGΔN的激酶活性，将蛋白质与等量的全长PknG，PknG-K181M的激酶死亡突变体组合。为了分析PknG-I87S / A92S和PknG-C / S的激酶活性，包括PknG（2μg）的PknG-N末端片段。磷酸化蛋白质在12.5％SDS / PAGE上分离，并通过放射自显影分析或通过PhosphorImage分析定量。通过使用放射性ATP消耗测定来确定IC 50值。在每种激酶测定中测试12种浓度的AX20017，范围为5×10-5M至1.5×10-10M [3]。

在指定浓度的AX20017（0,10,20μM）存在下孵育J774细胞30分钟后分析吞噬作用，然后用乳胶珠以10：1珠/细胞比例孵育细胞2小时。在持续存在抑制剂的情况下，然后如所述在3％多聚甲醛中固定。使用×63物镜用Axiophot观察细胞。如在不存在或存在AX20017（0,10,20μM）的情况下孵育48小时的细胞所述，通过掺入氚标记的胸苷（0.1μCi）12小时来分析J774细胞的增殖[3]。

[1]. Walburger A, et al. Protein kinase G from pathogenic mycobacteria promotes survival within macrophages. Science. 2004 Jun 18;304(5678):1800-4.

[2]. Santhi N, et al. Insights from the molecular docking of withanolide derivatives to the target protein PknG from Mycobacterium tuberculosis. Bioinformation. 2011;7(1):1-4.

[3]. Scherr N, et al. Structural basis for the specific inhibition of protein kinase G, a virulence factor of Mycobacterium tuberculosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Jul 17;104(29):12151-6.

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