N-去乙基舒尼替尼

N-Desethyl Sunitinib 是 sunitinib 的代谢物。Sunitinib是有效的,ATP 竞争的 VEGFR,PDGFRβ 和 KIT 抑制剂,能够抑制 VEGFR -1,VEGFR -2,VEGFR -3,PDGFRβ 和 KIT 的活性,Ki 值分别为 2,9,17,8 和 4 nM。

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舒尼替尼还有效抑制Kit和FLT-3 [1]。舒尼替尼是VEGFR2(Flk1)和PDGFRβ的有效ATP竞争性抑制剂,Ki分别为9 nM和8 nM,对VEGFR2和PDGFR的选择性比FGFR-1,EGFR,Cdk2,Met,IGFR-高10倍。 1,Abl和src。在表达VEGFR2或PDGFRβ的血清饥饿的NIH-3T3细胞中,舒尼替尼抑制VEGF依赖性VEGFR2磷酸化和PDGF依赖性PDGFRβ磷酸化,IC50分别为10nM和10nM。舒尼替尼抑制VEGF诱导的血清饥饿HUVECs增殖,IC50为40 nM,抑制PDGF诱导的过表达PDGFRβ或PDGFRα的NIH-3T3细胞增殖,IC50分别为39 nM和69 nM [2]。舒尼替尼抑制野生型FLT3,FLT3-ITD和FLT3-Asp835的磷酸化,IC50分别为250 nM,50 nM和30 nM。舒尼替尼抑制MV4; 11和OC1-AML5细胞的增殖,IC50分别为8 nM和14 nM,并以剂量依赖的方式诱导细胞凋亡[3]。

舒尼替尼(20-80mg/kg /天)对多种肿瘤异种移植模型表现出广泛且有效的剂量依赖性抗肿瘤活性,包括HT-29,A431,Colo205,H-460,SF763T,C6,A375或MDA。 -MB-435,与体内VEGFR2或PDGFR磷酸化和信号传导的实质性和选择性抑制一致。舒尼替尼(80mg/kg /天)持续21天导致8只小鼠中的6只完全肿瘤消退,在治疗结束后的110天观察期内没有肿瘤再生长。使用舒尼替尼的第二轮治疗对于在第一轮治疗期间未完全消退的肿瘤仍然有效。舒尼替尼治疗导致肿瘤MVD显着降低,SF763T胶质瘤肿瘤减少约40％。 SU11248处理导致表达荧光素酶的PC-3M异种移植物的额外肿瘤生长的完全抑制,尽管肿瘤大小没有减少[2]。舒尼替尼治疗(20 mg/kg /天)显着抑制皮下MV4; 11(FLT3-ITD)异种移植物的生长并延长FLT3-ITD骨髓移植模型的存活率[3]。

使用含有RTK的完整细胞质结构域的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白测定舒尼替尼对VEGFR2（Flk-1）和PDGFRβ的IC 50值。用于定量VEGFR2（Flk-1）和PDGFRβ的反式磷酸化活性的生化酪氨酸激酶测定在96孔微量滴定板中进行，所述96孔微量滴定板预涂覆（在PBS中20μg/孔;在4℃温育过夜）与肽底物聚 - Glu，Tyr（4：1）。通过在PBS中添加1-5％（w / v）BSA来阻断过量的蛋白质结合位点。纯化的GST-融合蛋白在杆状病毒感染的昆虫细胞中产生。然后将GST-VEGFR2和GST-PDGFRβ加入到由100mM HEPES，50mM NaCl，40μMNaVO4和0.02％（w / v）BSA组成的2x浓度激酶稀释缓冲液中的微量滴定孔中。 GST-VEGFR2或GST-PDGFRβ的最终酶浓度为50ng / mL。随后将25μL稀释的舒尼替尼加入每个反应孔中以产生适合于每种酶的一系列抑制剂浓度。通过在MnCl 2溶液中加入不同浓度的ATP引发激酶反应，使得最终的ATP浓度跨越酶的Km，并且MnCl 2的最终浓度为10mM。将板在室温下温育5-15分钟，然后加入EDTA终止反应。然后用TBST将板洗涤三次。将兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗血清以1：10,000稀释度加入到含有0.5％（w / v）BSA，0.025％（w / v）脱脂奶粉和100μMNaVO4的TBST中，并在37°温育1小时。 C。然后将板用TBST洗涤三次，然后加入与辣根过氧化物酶缀合的山羊抗兔抗血清（在TBST中1：10,000稀释）。将板在37℃温育1小时，然后用TBST洗涤三次。在加入2,2'-连氮基 - 二 - [3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐]作为底物后，定量每孔中磷酸酪氨酸的量。

在加入舒尼替尼和FL（50ng / mL;仅FLT3-WT细胞）之前，将细胞在含有0.1％FBS的培养基中饥饿过夜。使用Alamar Blue测定法或台盼蓝细胞活力测定法在培养48小时后测量增殖。通过蛋白质印迹法在加入舒尼替尼后24小时测量细胞凋亡，以检测聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）的裂解或半胱天冬酶-3的水平。

[1]. Sun L, et al. Discovery of 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2- dihydroindol-(3Z)-ylidenemethyl]-2,4- dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid (2-diethylaminoethyl)amide, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial and platelet-derived growth factor r

[2]. Mendel DB, et al. In vivo antitumor activity of SU11248, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor receptors: determination of a pharmacokinetic/pharmacodynamic relationship. Clin Can

[3]. O'Farrell AM, et al. SU11248 is a novel FLT3 tyrosine kinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo. Blood. 2003 May 1;101(9):3597-605. Epub 2003 Jan 16.

磺丁基-β-环糊精钠盐 | 环孢霉素A | 2-(3,6-二乙酰氧基-2,7-二氯-9H-氧杂蒽-9-基)苯甲酸 | 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐 | GW4869 | 乙莫克舍 | (2R,2'R,3R,3'R,4S,4'S,5R,5'R,6S,6'S)-6,6'-硫代双(4-(4-(3-氟苯基)-1H-1,-1H-1,2,3-三唑-1-基)-2-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,5-二醇) | Mitoquinone甲磺酸盐 | GSK2795039 | CBIC2 | BAPTA-AM | AP20187 | GKT137831 | D-(-)-荧光素 | 单响尾蛇毒蛋白