2-(六氢-4-甲基-1H-1,4-二氮杂卓-1-基)-6,7-二甲氧基-N-[1-(苯基甲基)-4-哌啶基]-4-喹唑啉胺

BIX-01294 是一种 G9a 组蛋白甲基转移酶 (G9a Histone Methyltransferase) 抑制剂,IC50 值为 1.9 μM。

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IC50: 1.9 μM (G9a Histone Methyltransferase)

GIXanull ES细胞的BIX-01294(4.1μM)处理导致H3K9me2水平的进一步降低。 BIX-01294在几个G9a靶基因上减少H3K9me2 [1]。 BIX-01294(5μM)降低原核和2细胞期胚胎中的全局H3K9甲基化水平。短暂暴露于BIX-01294的胚胎具有降低的妊娠能力[2]。 BIX-01294(1μg/ mL)导致胎儿PASMC的BrdU掺入减少。 BIX-01294处理减少了PDGF诱导的PASMCs迁移[3]。

将测试化合物在含有4％DMSO的50mM Tris-HCl pH 8.5中稀释至12μg/ mL，并将10μL分配到孔中。空白孔和对照孔仅接受化合物缓冲液。将10μg/ mL的GST-G9a和40μM的SAM在50mM Tris HCl pH 8.5 / 10mM DTT中稀释，并以20μL的体积加入。空白孔仅接收Tris / DTT缓冲液。通过在50mM Tris pH 8.5中以10μL的体积加入800nM H3（1-20） - 生长素底物引发反应，并在室温下温育60分钟。用100μL的ish缓冲液（50mM Tris pH 7.4,150mM NaCl，0.05％Tween 20,0.2％BSA）洗涤板3次。接下来，含有5ngα-2X-二甲基H3的50μLLooroimmunoassay（FI）缓冲液（50mM Tris HCl pH 7.8,150mM NaCl，0.05％吐温40,25μMDTPA，0.2％BSA，0.05％BGG）将-K9和5ng山羊抗兔Eu螯合物加入到板的所有孔中，并将平板在室温下再温育1小时。将板用100μL的ish缓冲液洗涤3次，并向每个孔中加入50μL的增强溶液。在Viewlux微板成像仪成像45分钟后测量时间分辨荧光15秒，具有354μs窗口，400μs延迟，360nm激发和618nm发射。

简言之，将胎儿PASMC铺板于96孔板中，并在含有0.1％血清的培养基中饥饿24小时。在BIX-01294存在或不存在下，以指定浓度加入PDGF-BB 24小时。在分析之前18小时将BrdU标记溶液添加到每个孔中。在除去孔内容物后，在室温下向每个孔中加入变性溶液30分钟。然后，向每个孔中加入抗BrdU抗体并孵育1小时，并在室温下在孔中加入过氧化物酶山羊抗小鼠IgG HRP缀合物30分钟。在Glomax多重检测系统上在450-540nm处读取吸光度。

[1]. Kubicek S, et al. Reversal of H3K9me2 by a small-molecule inhibitor for the G9a histone methyltransferase. Mol Cell. 2007 Feb 9;25(3):473-81.

[2]. Park KE, et al. IVMBIX-01294, an inhibitor of the histone methyltransferase EHMT2, disrupts histone H3 lysine 9 (H3K9) dimethylation in the cleavage-stage porcine embryo. Reprod Fertil Dev. 2012;24(6):813-21.

[3]. Yang Q, et al. BIX-01294 treatment blocks cell proliferation, migration and contractility in ovine foetal pulmonary arterial smooth muscle cells. Cell Prolif. 2012 Aug;45(4):335-44.

GSK126 | Tazemetostat (EPZ-6438) | UNC0642 | 1-异丙基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢-3-吡啶基)甲基]-6-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-吡啶基]-1H-吲唑-4-甲酰胺 | 匹诺司他 | 3-去氮腺嘌呤A | GSK3326595 | N-[(1,2-二氢-6-甲基-2-氧代-4-丙基-3-吡啶基)甲基]-1-(1-甲基乙基)-6-[6-[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-3-吡啶基]-1H-吲唑-4-甲酰胺 | EPZ031686 | AZ505二三氟乙酸盐 | N1-甲基-N1-[[4-[4-(异丙氧基)苯基]-1H-吡咯-3-基]甲基]-1,2-乙二胺 | EPZ004777 | EPZ015666 | GSK591 | 毛壳素