GDC-0834

GDC-0834 是一种有效的选择性 BTK 抑制剂。GDC-0834 抑制 BTK,在体外酶实验和细胞实验中,IC50 分别为 5.9 和 6.4 nM,而在小鼠和大鼠体内,IC50 分别为 1.1 和 5.6 μM。

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> BTK

研究领域 >> 炎症/免疫

IC50: 5.9 nM (BTK)[1]

GDC-0834抑制BTK激酶活性,IC50值为5.9±1.1 nM,Hill斜率值为-0.84±0.07(平均值±SE)[1]。 GDC-0834被证明是六种已知醛氧化酶(AO)底物的有效可逆抑制剂,IC50值范围为0.86-1.87μM[2]。

用GDC-0834处理BALB/c小鼠导致pBTK-Tyr223的剂量依赖性抑制。给予150或100mg/kg GDC-0834 2小时的动物显示血液中pBTK-Tyr223水平的完全抑制,平均抑制分别为97％和96％。在大鼠CIA研究中,GDC-0834以剂量依赖性方式抑制大鼠血液中的pBTK-Tyr223。大鼠中pBTK-Tyr223抑制的IC50估计值为5.6±1.6μM,m为0.51±0.087(平均值±SE)[1]。

通过在Lanthascreen测定中确定外源肽产物的磷酸化来量化Btk活性。在选择最终反应条件之前，还评估了ATP和肽的Km值。在25μL的最终反应体积中，Btk [人，全长，C-末端V5-6×His，在Sf9细胞中表达;将0.075ng /25μL反应物与50mM HEPES，pH 7.5,10mM MgCl 2,2mM MnCl 2,2mM二硫苏糖醇，0.2mM NaVO 4,0.01％酪蛋白，0.01％Triton X-100,2.5％甘油和0.4一起温育。 μM荧光素poly-Glu / Ala / Tyr]。通过添加ATP至25μM（Km的ATP）来引发反应。在室温下温育60分钟后，通过在室温下在60mM EDTA中加入终浓度的2nM Tb-PY20检测抗体30分钟来终止反应。在PerkinElmer Envision上测定检测，在495和520nm处具有340nM激发和发射。响应与BTK抑制剂浓度数据的拟合采用GraphPad Prism 5.00版[1]。

小鼠[1]为了研究GDC-0834在小鼠血液中抑制pBTK-Tyr223的体内效力，给BALB / c小鼠口服GDC-0834，剂量分别为25,50,100和150mg / kg，在给药后2,4或6小时从小鼠收集末端血液样品。每个时间点处死3只动物用于血液取样。如下所述，使用LC / MS / MS定量GDC-0834血浆水平。通过蛋白质印迹在血液中测定BTK-pTyr223（pBTK）和总BTK的水平。使用兔多克隆pBTK和小鼠单克隆总BTK。使用LI-COR Odyssey成像仪和软件对波段进行量化。将pBTK标准化为每个样品中的总BTK。然后将每个样品的归一化值与来自标准化载体处理的血液样品的值进行比较，以确定样品中BTK-Tyr223磷酸化的抑制百分比。具体地，使用以下等式：pBTK的抑制百分比=（1-（测试样品的标准化pBTK /载体处理的样品的标准化pBTK））×100。该研究的次要目的是通过检查pBTK抑制相对于GDC-0834血液浓度的时间过程来研究任何有效的时间延迟。在pBTK抑制相对于GDC-0834浓度的图中没有明显的滞后现象。大鼠[1]在Bolder BioPATH的雌性Lewis大鼠中诱导关节炎。简而言之，用异氟烷麻醉动物（每组10只大鼠），并在第0天和第6天注射300μL弗氏不完全佐剂，其在尾根部含有2mg / mL牛II型胶原，在背部有两个部位。口服给予GDC-0834 [载体，1,3,10,30和100 mg / kg bid（每日两次），间隔12小时，载体，10,30,100 mg / kg每日一次（QD）24 -h间隔，每隔一天100毫克/千克（Q2D），间隔48天，在研究的第0天开始并持续到第16天。从第9天到第17天，每天进行踝关节的卡尺测量，并且基于梯形法则计算踝直径 - 时间曲线下面积。在第17天的最终体重测量后，将动物麻醉以进行末端血清收集，然后实施安乐死以进行组织收集。在用载体治疗的正常大鼠中也测量踝直径（n = 6）。

[1]. Liu L, et al. Antiarthritis effect of a novel Bruton's tyrosine kinase (BTK) inhibitor in rat collagen-induced arthritis and mechanism-based pharmacokinetic/pharmacodynamic modeling: relationships between inhibition of BTK phosphorylation and efficacy. J

[2]. Sodhi JK, et al. A novel reaction mediated by human aldehyde oxidase: amide hydrolysis of GDC-0834. Drug Metab Dispos. 2015 Jun;43(6):908-15.

阿卡拉布替尼(ACP-196) | Fenebrutinib | 依伏替尼 | 司培替尼 | (±)-Zanubrutinib | (R)-6-氨基-9-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-3-基)-7-(4-苯氧基苯基)-7H-嘌呤-8(9H)-酮 | N-[2-甲基-5-[9-[4-[(甲基磺酰基)氨基]苯基]-2-氧代苯并[H]-1,6-萘啶-1(2H)-基]苯基]-2-丙烯酰胺 | BTK IN-1 | RN486 | (2Z)-2-氰基-N-(2,5-二溴苯基)-3-羟基-2-丁烯酰胺 | Vecabrutinib | N-[3-[4,5-二氢-4-甲基-6-[[4-(4-吗啉基羰基)苯基]氨基]-5-氧代-2-吡嗪基]-2-甲基苯基]-4-(叔丁基)苯甲酰胺 | GDC-0834外消旋 | BMS-986195 | CNX-774