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(2Z)-2-氰基-N-(2,5-二溴苯基)-3-羟基-2-丁烯酰胺

用途

LFM-A13 是一种有效的 BTK,JAK2,PLK 抑制剂,可抑制 BTK,Plx1 和 PLK3 的活性,IC50 分别为 2.5 μM,10 μM 和 61 μM。

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名称

[ CAS 号 ]:
244240-24-2

[ 中文名 ]:
(2Z)-2-氰基-N-(2,5-二溴苯基)-3-羟基-2-丁烯酰胺

[ 英文名 ]:
LFM-A13

[英文别名 ]:

trans-4,5-didehydro-neral
dehydrocitral
trans-dehydroneral
2,4,6-Octatrienal,3,7-dimethyl

生物活性

[ 描述 ]:

LFM-A13 是一种有效的 BTK,JAK2,PLK 抑制剂,可抑制 BTK,Plx1 和 PLK3 的活性,IC50 分别为 2.5 μM,10 μM 和 61 μM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> BTK

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> Polo样激酶(PLK)

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

Plx1:10 μM (IC50)

PLK3:61 μM (IC50)

BRK:267 μM (IC50)

BMX:281 μM (IC50)

FYN:240 μM (IC50)

Hepatocyte growth factor receptor kinase (Met):215 μM (IC50)

BTK:2.5 μM (IC50)

[体外研究]

LFM-A13显着抑制BTK活性,IC50为6.2±0.3μg/ mL(= 17.2±0.8μM)。计算的BTK,JAK1,JAK3,IRK,EGFR和HCK的LFM-A13的Kis为1.4,110,148,31.6,166和214μM。 LFM-A13(200μM)显着增加ALL-1细胞对神经酰胺诱导的细胞凋亡的化学敏感性[1]。 LFM-A13(100μM)抑制Epo诱导的R10细胞中EpoR,Jak2,Btk,Stat5和Erk1/2的磷酸化。 LFM-A13(100μM)抑制Jak2,Tec和Btk的自磷酸化,而不是COS细胞中的Lyn激酶自磷酸化[2]。 LFM-A13有效抑制Plx1,IC50为10μM;也抑制BRK,BMX,FYN,IC50分别为267,281,240和215μM[4]。

[体内研究]

LFM-A13(25,50和100mg/kg)对大鼠没有明显的毒性。 LFM-A13(50mg/kg,每周三次,ip)减弱小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生。 LFM-A13单独或与紫杉醇组合显示出对BMBB/c小鼠中DMBA诱导的乳腺肿瘤发生率,平均肿瘤数量,平均肿瘤重量和大小的显着影响。 LFM-A13(50 mg/kg,每周三次,腹腔注射)显着降低PLK1,cyclin D1,CDK-4,P53和Bcl-2的表达,但增加小鼠p21,IκB,Bax和caspase 3的表达。 [3]。 LFM-A13(200 mg/kg)不会对大鼠造成血液学毒性。 LFM-A13(10或50mg/kg,ip)在乳腺癌的MMTV/Neu转基因小鼠模型中表现出剂量依赖性的抗肿瘤作用[4]。

[激酶实验]

将纯化的His6-Plx1（250ng）加入到含有1x激酶缓冲液（10mM Tris-HCl，pH7.5,10mM MgCl2和1mM TT），25μM冷ATP和1μCi的20μL反应混合物中[ γ-32P] ATP在不同浓度的LFM-A13存在下，范围为5μg/ mL（13.9μM）至100μg/ mL（278μM）。将反应混合物在室温下温育15-30分钟，并通过加入2×SDS-PAGE还原样品缓冲液终止自磷酸化。在冷ATP存在下进行平行实验。然后使用市售的抗Plk抗体对激酶反应进行免疫印迹。免疫印迹证实每个反应中存在相同量的Plx1蛋白。此外，我们还检测了LFM-A13对Plx1对底物磷酸化的影响。简而言之，首先将250ng纯化的Plx1与不同浓度的LFM-A13在室温下孵育1小时。孵育1小时后，将含有反应混合物的试管置于冰上，加入底物，GST-Cdc25肽（254-316）（200ng），激酶缓冲液和[γ-32P] ATP并激活反应允许在室温下进行15分钟。用抗Cdc25抗体的免疫印迹用于证实在每种反应混合物中存在等量的底物肽。在测定中使用抗Plk抗体，谷胱甘肽-S-转移酶（GST）和ECL试剂盒的多克隆抗体。 LFM-A13的人PLK3抑制模式在滴定实验中使用增加浓度的[γ-32P] ATP和纯化的N-末端His6-标记的重组人PLK3，残基19-301，在Sf21昆虫细胞中由杆状病毒表达来检测。简言之，在25μL的最终反应体积中，将PLK3（h）（5-10mU）与8mM MOPS，pH 7.0,0.2mM EDTA，2mg / mL酪蛋白，10mM乙酸镁和[γ]一起温育。 -32P-ATP]（比活度约为500cpm / pmol，根据需要浓缩）。通过添加MgATP混合物引发反应。在室温下孵育40分钟后，通过加入5μL的3％磷酸溶液终止反应。然后将10微升反应物点在P30滤垫上，在75mM磷酸中洗涤3次，每次5分钟，在甲醇中洗涤一次，然后干燥并闪烁计数。 LFM-A13的PLK3的Ki由底物的磷酸化强度（1 / v）与抑制剂（i）的浓度（即LFM-A13）的倒数图计算。从这个Dixon图中，Ki表示EI复合体的解离常数，它由线性交点确定[4]。

[动物实验]

将携带一种或多种肿瘤的小鼠[4] Neu转基因小鼠随机置于研究中。为了评估肿瘤动力学，将荷瘤小鼠随机分配给载体对照组或治疗组。肿瘤生长通过每周三天用三维卡尺测量肿瘤来确定，并表示为立方毫米（mm 3）的肿瘤体积。使用长椭球体的体积公式计算肿瘤体积，V = 4/3×3.14×长度/ 2×宽度/ 2×深度/ 2。由于第0天转基因肿瘤体积的大的异质性，将每只小鼠的肿瘤生长标准化为该特定肿瘤的起始体积。因此，每只小鼠也作为其自身对照，并且产生肿瘤生长曲线以显示肿瘤体积的变化率。每周两次腹膜内注射LFM-A13（10或50mg / kg），每周连续5天。在第1,3,5,8,10和12天以6.7mg / kg的剂量水平腹膜内施用紫杉醇。吉西他滨在第1,8和15天以33.7mg / kg的剂量水平施用。将大鼠[4] Lewis大鼠保持在含有高压灭菌食物，水和寝具的微量过滤笼中。以多剂量水平静脉内注射LFM-A13治疗Lewis大鼠。 LFM-A13以含有10％DMSO作为载体的0.5mL推注给药。在第7天选择性地处死动物以通过评估多个器官中毒性病变的存在来确定LFM-A13的毒性。在用氯胺酮：甲苯噻嗪麻醉后通过心内穿刺收集血液并立即肝素化。使用HESKA Vet ABC-Diff血液学分析仪测定血细胞计数（红细胞[RBC]，白细胞[WBC]和血小板[Plt]）。在通过手动差异计数确定嗜中性粒细胞和淋巴细胞的百分比后，从WBC值计算绝对中性粒细胞计数（ANC）和绝对淋巴细胞计数（ALC）。对于载体对照和LFM-A13处理合并实验室参数的值，并且对于每个参数，使用学生t检验（载体与LFM-A13处理，不等方差，双尾）评估平均值之间的差异的统计学显着性。计算在Excel电子表格中执行。为了确定显着效果，使用Bonferroni方法调整p值以控制随机变化。对于组织病理学研究，将福尔马林固定组织脱水并通过常规方法包埋在石蜡中。制备具有固定的4-5微米组织切片的载玻片，并用苏木精和曙红染色。

[参考文献]

[1]. Mahajan S, et al. Rational design and synthesis of a novel anti-leukemic agent targeting Bruton's tyrosine kinase (BTK), LFM-A13 [alpha-cyano-beta-hydroxy-beta-methyl-N-(2, 5-dibromophenyl)propenamide]. J Biol Chem. 1999 Apr 2;274(14):9587-99.

[2]. van den Akker E, et al. The Btk inhibitor LFM-A13 is a potent inhibitor of Jak2 kinase activity. Biol Chem. 2004 May;385(5):409-13.

[3]. "Sahin K, et al. LFM-A13, a potent inhibitor of polo-like kinase, inhibits breast carcinogenesis by suppressing proliferation activity and inducing apoptosis in breast tumors of mice. Invest New Drugs. 2017 Nov 15."

[4]. Uckun FM, et al. Anti-breast cancer activity of LFM-A13, a potent inhibitor of Polo-like kinase (PLK). Bioorg Med Chem. 2007 Jan 15;15(2):800-14. Epub 2006 Oct 26.

[相关活性小分子]

物理化学性质

[ 密度 ]:
1.9±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
487.9±45.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₁₁H₈Br₂N₂O₂

[ 分子量 ]:
360.001

[ 闪点 ]:
248.9±28.7 °C

[ 精确质量 ]:
357.895233

[ PSA ]:
73.12000

[ LogP ]:
3.42

[ 外观性状 ]:
powder | white

[ 蒸汽压 ]:
0.0±1.3 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.677

[ 储存条件 ]:
−20°C

[ 水溶解性 ]:
DMSO: 15 mg/mL

MSDS

详细MSDS(安全技术说明书)

安全信息

[ 符号 ]:

GHS07

[ 信号词 ]:
Warning

[ 危害声明 ]:
H302-H312-H332

[ 警示性声明 ]:
P280

[ 危害码 (欧洲) ]:
Xn: Harmful;

[ 风险声明 (欧洲) ]:
20/21/22

[ 安全声明 (欧洲) ]:
36/37

[ 危险品运输编码 ]:
NONH for all modes of transport

[ WGK德国 ]:
3

合成路线

详细合成路线

上下游产品

上游产品

下游产品

文献

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Mol. Cancer 9 , 267, (2010)

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J. Exp. Med. 206(4) , 937-52, (2009)

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