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1-[N,O-二(5-异喹啉磺酰基)-N-甲基-L-型酪氨酸]-4-苯基哌嗪

用途

KN-62 是一种有效的选择性的钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II (CaMK-II)抑制剂,IC50 为 0.9 μM,在HEK293 细胞中,KN-62 也非竞争性拮抗P2X7 受体,IC50 约为 15 nM。

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名称

[ CAS 号 ]:
127191-97-3

[ 中文名 ]:
1-[N,O-二(5-异喹啉磺酰基)-N-甲基-L-型酪氨酸]-4-苯基哌嗪

[ 英文名 ]:
KN-62

[中文别名 ]:

[英文别名 ]:

kn-62
MFCD00083180

生物活性

[ 描述 ]:

KN-62 是一种有效的选择性的钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II (CaMK-II)抑制剂,IC50 为 0.9 μM,在HEK293 细胞中,KN-62 也非竞争性拮抗P2X7 受体,IC50 约为 15 nM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 神经信号通路 >> 蛋白激酶

信号通路 >> 跨膜转运 >> P2X受体

研究领域 >> 代谢疾病

[ 靶点 ]

IC50: 0.9 μM (CaMK II)[1], 15 nM (P2X7 receptor, in HEK293 cells)[2]

[体外研究]

KN-62是Ca2 + /钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的选择性拮抗剂。 KN-62有效地拮抗ATP刺激的Ba2 +流入装载fura-2的人淋巴细胞,IC50为12.7±1.5nM(n = 3),并且在500nM浓度下完全抑制通量。类似地,KN-62抑制ATP刺激的乙锭+摄取,通过时间分辨流式细胞仪测量,IC50为13.1±2.6 nM(n = 4),并且在500 nM时完全抑制通量[1]。发现KN-62在功能测定中是有效的拮抗剂,在表达重组人P2X7受体的HEK293细胞中抑制ATP诱导的K +流出。在人白血病B淋巴细胞中,KN-62降低了Bz-ATP诱导的较大渗透阳离子(如乙锭)的渗透率增加,IC50为13.1 nM。浓度为3μM的KN-62对通过大鼠P2X7受体的ATP诱导的乙锭流入没有影响,而人P2X7受体的IC50为0.1μM。 KN-62对P2家族中的P2X7受体具有相当大的选择性[2]。

[体内研究]

通过CAMKII抑制剂KN-62(1μg/位点,icv)防止ZnCl 2(10mg/kg,po)的抗抑郁样行为(p <0.01)。双向ANOVA揭示了KN-62治疗的显着主要作用[F(1,28)= 27.47,p <0.01],没有ZnCl2处理的主要影响[F(1,28)= 0.84,p> 0.05] KN-62×ZnCl2处理相互作用[F(1,28)= 22.57,p <0.01]对不动时间的显着影响。如事后分析所揭示的,用KN-62处理动物可完全防止ZnCl2的抗静止作用。在开放场试验中没有观察到运动活动的影响：(KN-62处理[F(1,24)= 1.97,p> 0.05],ZnCl2处理[F(1,24)= 3.99,p> 0.05]和KN-62×ZnCl2处理相互作用[F(1,24)= 0.61,p> 0.05])[3]。

[激酶实验]

淋巴细胞（1×107 / mL）与[3H] - 油酸（2-5μCi/ mL，比活度10 Ci / mmol）在补充庆大霉素（40μg/ mL）的RPMI-1640培养基中培养20-24小时），在37℃下10％热灭活的胎牛血清（FCS）以标记膜磷脂。将标记的细胞在HEPES缓冲盐水中洗涤两次，然后在HEPES缓冲盐水或含有HEPES 10mM，pH 7.4，牛血清白蛋白（BSA）1g / L和D-葡萄糖5mM和CaCl 2的150mM KCl培养基中最后洗涤。 1 mM。将含有1.1×10 ^{7 / mL淋巴细胞的3mL等分试样温热至37℃并与或不与KN-62或KN-04（1nM-500nM）一起温育5分钟，然后加入900mL等分试样。将100uL丁醇（终浓度30mM）再保持5分钟，并用1mM ATP刺激15分钟，同时在持续存在抑制剂或稀释剂的情况下温和混合。通过加入1mL 20mM MgCl 2终止磷脂酶D反应，然后离心并加入1mL冰冷的甲醇。将膜脂在4℃下在N 2下萃取到氯仿/ HCl中，并通过硅胶薄层色谱（tlc）与溶剂系统分离，乙酸乙酯/异辛烷/乙酸/水（13：2：3：10），v / v）在饱和条件下。通过放射自显影定位样品斑点，并通过真实标准鉴定[3H] - 磷脂酰丁醇（[3H] -Put）斑点。将[3H] -Put和[3H] - 磷脂斑点刮入闪烁液（甲苯中的PPO，4g / L）并在液体闪烁计数器中计数。 [3H] -PBut的量表示为总3H标记的细胞磷脂的百分比。磷脂酶D测定一式三份进行[1]。}

[细胞实验]

使用用编码人P2X7受体的cDNA稳定转染的贴壁HEK293细胞进行所有实验。将12孔聚赖氨酸包被的板上的贴壁细胞在37℃下在1mL生理盐溶液（125mM NaCl，5mM KCl，1mM MgCl 2,1.5mM CaCl 2,25mM NaHEPES（pH 7.5），10mM D中孵育。 - 葡萄糖，1mg / mL BSA）。拮抗剂（例如，KN-62）从溶解在DMSO中的1,000×储备溶液中添加。在用3mM ATP（终浓度）刺激10分钟之前，将细胞与拮抗剂（例如KN-62）预温育15分钟。通过在每个孔中快速抽吸细胞外培养基终止反应。然后用1mL 10％HNO 3将每个孔中的贴壁细胞过夜提取。通过原子吸收分光光度法测定这些硝酸提取物中的K +含量。在每个单独的实验中针对所有测试条件运行重复或一式三份的孔[2]。

[动物实验]

小鼠[3]使用雌性瑞士小鼠（45-55天龄，体重30-45g）。使用以下药物：ZnCl2（1或10 mg / kg），H-89（1μg/位点，PKA抑制剂），KN-62（1μg/位点，CAMKII抑制剂），白屈菜红碱（1μg/位点，PKC）抑制剂），PD98059（5μg/位点，MAPKK / MEK 1/2抑制剂），U0126（5μg/位点，MEK1 / 2抑制剂），LY294002（10 nmol /位点，PI3K抑制剂），AR-A014418（0.001μg/位点，选择性GSK-3β抑制剂）。将ZnCl 2溶解在蒸馏水中并口服（po）。将H-89，KN-62，白屈菜红碱，PD98059，U0126，LY294002，AR-A014418溶于盐水（0.9％NaCl）中，终浓度为1％二甲基亚砜（DMSO），并通过脑室内（icv）途径给药。在治疗前新鲜制备药物，并以10mL / kg体重（po途径）或5μL/部位（icv途径）的体积给药。对照动物接受适当的载体。

[参考文献]

[1]. Gargett CE, et al. The isoquinoline derivative KN-62 a potent antagonist of the P2Z-receptor of human lymphocytes. Br J Pharmacol. 1997 Apr;120(8):1483-90.

[2]. Ravi RG, et al. Potent P2X7 Receptor Antagonists: Tyrosyl Derivatives Synthesized Using a Sequential Parallel Synthetic Approach. Drug Dev Res. 2001 Oct;54(2):75-87.

[3]. Manosso LM, et al. Antidepressant-like effect of zinc is dependent on signaling pathways implicated in BDNF modulation. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2015 Jun 3;59:59-67.

[相关活性小分子]

N-[2-[N-(4-氯肉桂)-N-甲基氨基]苯基]-N-(2-羟乙基)-4-甲氧苯磺酰胺磷酸酯盐 | STO-609 | 三磷酸腺苷二钠 | KN-92 盐酸盐 | A-740003 | A 438079 | CaMKII的-IN-1 | AF-353 | AZD9056盐酸盐 | PSB-12062 | A-317491 | A-804598 | MLCK抑制肽18 | 一个839977 | Autocamtide 2

物理化学性质

[ 密度 ]:
1.4±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
964.7±75.0 °C at 760 mmHg

[ 熔点 ]:
92-94°C

[ 分子式 ]:
C₃₈H₃₅N₅O₆S₂

[ 分子量 ]:
721.844

[ 闪点 ]:
537.3±37.1 °C

[ 精确质量 ]:
721.202881

[ PSA ]:
146.84000

[ LogP ]:
5.23

[ 外观性状 ]:
白色固体

[ 蒸汽压 ]:
0.0±0.3 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.686

[ 储存条件 ]:
−20°C

[ 水溶解性 ]:
45% (w/v) aq 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin: 0.93 mg/mL

MSDS

详细MSDS(安全技术说明书)

安全信息

[ 个人防护装备 ]:
Eyeshields;Gloves;type N95 (US);type P1 (EN143) respirator filter

[ 安全声明 (欧洲) ]:
S24/25

[ 危险品运输编码 ]:
NONH for all modes of transport

[ WGK德国 ]:
3

文献

The Ca²⁺-calmodulin-Ca²⁺/calmodulin-dependent protein kinase II signaling pathway is involved in oxidative stress-induced mitochondrial permeability transition and apoptosis in isolated rat hepatocytes.

Arch. Toxicol. 88(9) , 1695-709, (2014)

Oxidative stress (OS) is a common event in most hepatopathies, leading to mitochondrial permeability transition pore (MPTP) formation and further exacerbation of both OS from mitochondrial origin and ...

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Physiol. Genomics 46(14) , 512-22, (2014)

The relative function of the P2X7 receptor, an ATP-gated ion channel, varies between humans due to polymorphisms in the P2RX7 gene. This study aimed to assess the functional impact of P2X7 variation i...

Modulation of P2X4/P2X7/Pannexin-1 sensitivity to extracellular ATP via Ivermectin induces a non-apoptotic and inflammatory form of cancer cell death.

Sci. Rep. 5 , 16222, (2015)

Overexpression of P2X7 receptors correlates with tumor growth and metastasis. Yet, release of ATP is associated with immunogenic cancer cell death as well as inflammatory responses caused by necrotic ...

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