MLCK抑制肽18

MLCK inhibitor peptide 18 是一种有效的 MLCK 抑制剂,IC50 值为 50 nM,同时较弱抑制 CaM kinase II 的活性。

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IC50: 50 nM (MLCK)[1]

MLCK抑制剂肽18对MLCK对肽底物的利用具有选择性作用,不干扰CaM对激酶的激活,对密切相关的CaMPKII没有显着的抑制活性,并且不抑制PKA [1]。

所有测定均在50μL的终体积中进行。每个点一式两份进行测试。标准测定条件为50 mM HEPES，0.2 mM [γ-32P] ATP（比活度200-300 cpm / pmol），1 mM DTT，1 mg / mL牛血清白蛋白，5 mM MgCl 2,150 mM KCl，15 mM NaCl，pH 7.5，含或不含抑制剂。合成底物浓度，MLCK的KKRPQRATSNVFAM-NH2，CaMPKII的PLRRTLSVAA-NH2和PKA的LRRASLG，为20μM。通过添加5μL酶（PKA）或酶：CaM复合物（用于MLCK和CaMPKII）开始反应。酶：CaM复合物通过在1μMCaM和5μMCaCl2（对于MLCK）或30μMCaM和2mM CaCl 2（对于CaMPKII）的存在下在冰中孵育1分钟来进行。 MLCK的测定条件为20分钟，25℃; CaMPKII的温度为8分钟，25℃; PKA为6分钟，25℃。将每个反应管的等分试样点在磷酸纤维素滤纸中。将滤膜在75mM磷酸溶液中洗涤，然后用95％乙醇洗涤，干燥，并置于含有10mL Ecoscint O的小瓶中。通过在Beckman 6500液体闪烁计数器中计数小瓶来测定放射性。没有应用淬火校正。将数据转化为最大酶活性的百分比，其中不存在抑制剂时的酶活性取为100％。通过对应于最大活性的15％-85％的数据点的线性回归数据分析来计算ICsub> 50的值。此分析使用InPlot 4.0版完成。

[1]. Lukas TJ, et al. Identification of novel classes of protein kinase inhibitors using combinatorial peptide chemistry based on functional genomics knowledge. J Med Chem. 1999 Mar 11;42(5):910-9.

(-)-II型肌球蛋白 | N-[2-[N-(4-氯肉桂)-N-甲基氨基]苯基]-N-(2-羟乙基)-4-甲氧苯磺酰胺磷酸酯盐 | STO-609 | 4-[[2-氟-3-[N'-(6-甲基吡啶-3-基)脲基]苯基]甲基]哌嗪-1-羧酸甲酯 | 1-[N,O-二(5-异喹啉磺酰基)-N-甲基-L-型酪氨酸]-4-苯基哌嗪 | KN-92 盐酸盐 | ML-7盐酸盐 | N-苄基-对甲苯磺酰胺 | CaMKII的-IN-1 | 1-(5-异喹啉基磺酰)哌嗪二盐酸盐 | Autocamtide 2 | 7-氨基-1-环丙基-3-乙基-1,2,3,4-四氢-2,4-二氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺 | 玛伐凯泰 | Rimacalib