Phosphoramidon Disodium

Phosphoramidon disodium 是金属蛋白酶 ( metalloprotease ) 抑制剂 。抑制内皮素转化酶 ( ECE ) ,中性肽内切酶 ( NEP ) 和血管紧张素转换酶 ( ACE ) 的IC50 值分别为 3.5 ,0.034 和 78 μM。

信号通路 >> 代谢酶/蛋白酶 >> 血管紧张素转换酶(ACE)

信号通路 >> 代谢酶/蛋白酶 >> 脑啡肽酶

研究领域 >> 心血管疾病

研究领域 >> 炎症/免疫

IC50: 3.5 μM (ECE), 34 nM (NEP), 78 μM (ACE)[1]

Phosphoramidon是一种天然存在的糖肽,首先从Streptomyces tanashiensis菌株中分离。它具有独特的化学结构,在L-鼠李糖和L-亮氨酸L-色氨酸之间具有氨基磷酸酯键。作为微生物代谢产物,磷酰胺对嗜热菌蛋白酶(一种从热解芽孢杆菌(Bacillus thermoproteolyticus)分离的锌内肽酶(Ki = 32 nM))表现出强大的抑制活性[2]。

鼻内施用磷酰胺在野生型小鼠中产生显着升高的脑Aβ水平。此外,在缺乏NEP和NEP2的双敲除小鼠中鼻内给予磷酰胺也显示出Aβ40水平升高[3]。磷酰胺阻断内皮素-1(ET-1)的形成,内皮素-1是一种与多种肺病的发病机理有关的促炎介质。通过肺组织学,支气管肺泡灌洗液(BAL)中性粒细胞含量,肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)标记的BAL巨噬细胞和肺泡间隔细胞凋亡[4]测定,磷酰胺显着降低LPS诱导的肺部炎症。磷酰胺显着降低ET-1水平,导致伴随的大ET-1增加和剂量依赖性减弱吲哚美辛诱导的胃粘膜损伤[5]。

通过使用Agilent 8453UV-vis分光光度计一式三份，在50mM Tris-HCl，10mM CaCl 2缓冲液（pH 7.5）中测定Ki值，其中FA-Gly-Leu-NH 2（FAGLA）作为底物。亨德森图用于计算Ki值。将缓冲液（970μL），磷酰胺（0-80nM，20μL）和嗜热菌蛋白酶（40nM，10μL）的混合物在比色杯（2mL）中于25℃温育15分钟。将FAGLA（0.1-0.5mM，1.0mL）在pH7.5的Tris缓冲液中的溶液加入到比色皿中。在340nm波长记录5分钟时，通过嗜热菌的裂解FAGLA的吸光度降低。嗜热菌的浓度由摩尔消光系数决定[2]。

将小鼠[3]磷酰胺以30mM的浓度溶解在磷酸盐缓冲盐水（PBS + 1mM抗坏血酸）中。将麻醉的小鼠放在他们的背上，每2分钟向交替的鼻孔施用8滴3-μL的磷酰胺溶液。这每天进行一次，持续5天。在麻醉下使小鼠安乐死以在第5天施用磷酰胺后2小时收集组织。对照小鼠仅用鼻内PBS载体溶液处理。取出脑并切割成所需的脑区域，然后在5M盐酸胍中匀浆以提取总Aβ。离心（16,000×g）后，将上清液稀释10倍，通过特异性ELISA定量Aβ（1-42和1-40）。大鼠[4]通过雾化，腹膜内或气管内用磷酰胺处理动物。为了检查腹膜内给药的效果，给动物注射溶解在0.5mL磷酸盐缓冲盐水（PBS）中的0.5mg磷酰胺。对于雾化研究，将动物置于暴露室中并用溶于蒸馏水中的0.1％磷酰胺溶液组成的气溶胶处理1小时。雾化的磷酰胺通过连接到空气压缩机的Misty-Ox雾化器通过天花板端口输送。通过连接到第二流出端口的鼓风机施加负压，以确保气溶胶的适当循环。

[1]. Kukkola PJ, et al. Differential structure-activity relationships of phosphoramidon analogues for inhibition of three metalloproteases: endothelin-converting enzyme, neutral endopeptidase, and angiotensin-converting enzyme.J CardiovascPharmacol. 1995;26Suppl 3:S65-8.

[2]. Sun Q, et al. Synthesis and enzymatic evaluation of phosphoramidon and its β anomer: Anomerization of α-l-rhamnose triacetate upon phosphitylation.Bioorg Med Chem. 2013 Nov 1;21(21):6778-87.

[3]. Hanson LR, et al. Intranasal phosphoramidon increases beta-amyloid levels in wild-type and NEP/NEP2-deficient mice.J MolNeurosci. 2011 Mar;43(3):424-7.

[4]. Bhavsar TM, et al. Phosphoramidon, an endothelin-converting enzyme inhibitor, attenuates lipopolysaccharide-induced acute lung injury.Exp Lung Res. 2008 Mar;34(3):141-54.

[5]. Matsumaru K, et al. Phosphoramidon, an inhibitor of endothelin-converting enzyme, prevents indomethacin-induced gastric mucosal damage in rats.Life Sci. 1998;62(7):PL79-84.

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