依沙替康甲磺酸盐

Exatecan Mesylate 是一种水溶性的拓扑异构酶 I (topoisomerase I) 抑制剂,IC50 值为 2.2 μM (0.975 μg/mL),可用于癌症研究。

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 拓扑异构酶

研究领域 >> 癌症

Topoisomerase I:2.2 μM (IC50)

Exatecan Mesylate是一种有效的拓扑异构酶I抑制剂,IC50为0.975μg/ mL。 Exatecan Mesylate(DX-8951f)显着抑制几种癌细胞系的增殖,乳腺癌细胞,结肠癌细胞的平均GI50为2.02 ng/mL,2.92 ng/mL,1.53 ng/mL和0.877 ng/mL,胃癌细胞和肺癌细胞分别[1]。 Exatecan Mesylate(DX-8951f)显示针对PC-6,PC-6/SN2-5细胞的细胞毒活性,平均GI50分别为0.186和0.395 ng/mL。 Exatecan Mesylate(34 nM)可稳定PC-6和PC-6/SN2-5细胞中的DNA-TopoI复合物[3]。

Exatecan Mesylate(DX-8951f,3.325-50 mg/kg,iv)在携带肿瘤细胞的小鼠模型中表现出抗肿瘤活性,无毒性死亡[1]。 Exatecan Mesylate(15,25 mg/kg,iv)在MIA-PaCa-2早期模型和BxPC-3的早期模型中高效抑制MIA-PaCa,BxPC-3原发性肿瘤生长。 Exatecan Mesylate(15,25 mg/kg,iv)也显着抑制BxPC-3淋巴转移并完全消除BxPC-3晚期癌症模型中的肺转移[2]。

用SDS缓冲液（10mM HEPES，2mM原钒酸盐，10mM NaF，10mM焦磷酸盐，1mMPMSF，10μg/ mL亮抑酶肽，10％2-巯基乙醇，10％甘油，8％SDS裂解细胞（5×106）。 ，42mM Tris-HCl，0.002％溴酚蓝，pH7.4）。将全细胞裂解物中的蛋白质在7.5％聚丙烯酰胺凝胶中分离并印迹到硝酸纤维素膜上。用抗Topo I人抗体处理膜，随后用辣根过氧化物酶缀合的蛋白A处理。用ECL试剂检测Topo I特异性条带。为获得核提取物，用冰冷的缓冲液（2mM K2HPO4,5mM MgCl 2,150mM NaCl，1mM EGTA，0.1mM二硫苏糖醇）洗涤细胞（5×107），重悬于含有0.35％Triton-X100的缓冲液中。和PMSF，然后在冰上孵育10分钟。将得到的裂解物离心，然后将沉淀物与含有0.35M NaCl的缓冲液在4℃下温育1小时。离心（18,000g，10分钟）后，使用蛋白质测定试剂盒测定上清液（核提取物）的蛋白质浓度。使用抗Topo I抗体通过蛋白质印迹分析分析相同量的核蛋白[3]。

生长抑制实验在96孔平底微孔板中进行，并且通过MTT测定确定孵育结束时活细胞的量。因此，将150μL培养基中的500-20000个细胞/孔接种并培养24小时（P388，CCRF-CEM和K562细胞4小时），药物（包括Exatecan Mesylate，150μL培养基/孔），或加入单独的培养基作为对照，并将细胞再培养3天。加入MTT（20μL/孔，5mg / mL磷酸盐缓冲盐水）后，将板孵育4小时，以800g离心5分钟，然后除去培养基，形成的蓝色染料溶解于150μLDMSO。使用Microplate Reader 3550型[1]在540nm处测量吸光度。

在BxPC-3-GFP和MIA-PaCa-2-GFP原位植入后3周，将小鼠随机分成5个不同组，每组5只小鼠用于治疗目的。第1组作为阴性对照，不接受任何治疗。第2组和第3组分别以25和15mg / kg /剂量用Exatecan Mesylate处理。第4组和第5组分别接受300和150mg / kg /剂量的吉西他滨治疗。在BxPC-3-GFP原位植入后6周，将小鼠随机分成三组，每组20只小鼠，用于治疗目的。第1组作为阴性对照，不接受任何治疗。组2用25mg / kg /剂量的Exatecan Mesylate处理，组3用300mg / kg /剂量的吉西他滨处理。两种药物的给药每周进行一次，持续3周，停药2周，然后继续另外3周。在早期和晚期癌症模型中，每周测量一次原发肿瘤大小和体重。使用公式a×b2×0.5计算肿瘤体积，其中a和b分别代表更大和更小的直径。在研究结束时，处死小鼠并进行探索。记录每只小鼠的最终肿瘤重量和原发性肿瘤和转移瘤的直接GFP图像。使用公式IR（％）=（1-TWt / TWc）×100计算肿瘤生长IR，其中TWt和TWc分别是治疗组和对照组的平均肿瘤重量[2]。

[1]. Mitsui I, et al. A new water-soluble camptothecin derivative, DX-8951f, exhibits potent antitumor activity against human tumors in vitro and in vivo. Jpn J Cancer Res. 1995 Aug;86(8):776-82.

[2]. Sun FX, et al. Efficacy of camptothecin analog DX-8951f (Exatecan Mesylate) on human pancreatic cancer in an orthotopic metastatic model. Cancer Res. 2003 Jan 1;63(1):80-5.

[3]. Joto N, et al. DX-8951f, a water-soluble camptothecin analog, exhibits potent antitumor activity against a human lung cancer cell line and its SN-38-resistant variant. Int J Cancer. 1997 Aug 7;72(4):680-6.

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