[ 描述 ]:
Erlotinib(NSC 718781; OSI-774; CP-358774)甲磺酸盐是人EGFR抑制剂,IC50为2 nM。
[ 相关类别 ]:
[ 靶点 ]
[体外研究]
厄洛替尼(CP-358,774)也是EGFR重组细胞内(激酶)结构域的有效抑制剂,IC50为1 nM。厄洛替尼强烈抑制DiFi细胞的增殖,对于8天的增殖试验,IC50为100 nM [1]。与单独的任一种药剂相比,B-DIM和厄洛替尼(2μM)的组合导致BxPC-3细胞中集落形成的显着抑制。与单独使用任一种药物的细胞凋亡作用相比,B-DIM和厄洛替尼(2μM)的组合仅在BxPC-3细胞中导致显着的细胞凋亡诱导[2]。
[体内研究]
厄洛替尼(5 mg/kg)比较Bcrp1/Mdr1a/1b -/-与WT小鼠(分别为7,419±1,720和4,957±1,735 ng * h/mL)后,AUC0-inf之间的差异有1.49倍有统计学意义。 ,P = 0.01)[3]。给博来霉素(BLM)治疗的大鼠施用厄洛替尼(10mg/kg /天,或20mg/kg /天)显示在宏观发现,肺重量,组织病理学评分(肺病变密度)等指标中没有肺损伤的恶化。和肺纤维化评分)和肺羟脯氨酸(HyP)水平。结果表明,厄洛替尼对大鼠BLM诱导的肺损伤没有任何加剧作用[4]。
[激酶实验]
激酶反应在50μL50mM HEPES（pH 7.3）中进行，含有125 mM NaCl，24 mM MgCl 2,0.1 mMNa3VO4,20μMATP，1.6μg/ mL EGF和15 ng EGFR，从A431中亲和纯化细胞膜。加入DMSO中的化合物，使DMSO的最终浓度为2.5％。通过添加ATP引发磷酸化，并在室温下继续进行8mm，持续摇动。通过抽吸反应混合物终止激酶反应，并用洗涤缓冲液洗涤4次。通过用50μL每孔HRP-缀合的PY54抗磷酸酪氨酸抗体孵育25mim来测量磷酸化PGT，在封闭缓冲液（3％BSA和0.05％Tween 20的PBS溶液）中稀释至0.2μg/ mL。通过抽吸除去抗体，并用洗涤缓冲液洗涤板4次。通过添加每孔50μL的TMB微孔过氧化物酶底物来培养结肠信号，并通过添加0.09M硫酸（每孔50μL）来终止。通过测量450nm处的吸光度来估计磷酸酪氨酸。对照的信号通常为0.6-1.2吸光度单位，在没有AlP，EGFR或POT的孔中基本上没有背景，并且与孵育10毫米的时间成比例[1]。
[细胞实验]
为了测试用B-DIM，厄洛替尼或其组合处理的细胞的活力，将BxPC-3和MIAPaCa细胞接种（每孔3,000-5,000）在96孔板中并在37℃温育过夜。最初测试B-DIM（10-50μM）和厄洛替尼（1-5μM）的浓度范围。基于初始结果，选择B-DIM（20μM）和厄洛替尼（2μM）的浓度用于所有测定。 B-DIM（20μM），厄洛替尼（2μM）和组合对BxPC-3和MIAPaCa细胞的作用在72小时后通过标准MTT测定法测定并重复三次。通过Tecan微孔板荧光计在595nm处测量颜色强度。 DMSO处理的细胞被认为是未处理的对照并且被指定为100％的值。除上述检测外，我们还进行了克隆形成试验，以评估治疗效果[2]。
[动物实验]
用5mg / kg厄洛替尼对小鼠[3] Bcrp1 / Mdr1a / 1b - / - 和WT小鼠进行po或ip处理。假设药物吸收良好且生物利用度完全，选择ip给药。从侧尾静脉的尖端以三个系列进行取样。在第一系列期间，在注射后15分钟和0.5,1.5,5和10小时收集全血样品。基于该初始组的结果，两个后续系列的采样时间适应于注射后5和15分钟以及0.5,1.5,4和8小时。收集后，立即将血液样品离心，并将血浆储存在-20°C，直至进行高效液相色谱分析。大鼠[4]使用7周龄雄性Crl：CD（SD）大鼠（244-297g）。通过管饲法口服厄洛替尼（10mg / kg和20mg / kg）治疗动物。
[参考文献]
[1]. Moyer JD, et al. Induction of apoptosis and cell cycle arrest by CP-358,774, an inhibitor of epidermal growth factor receptor tyrosine kinase. Cancer Res. 1997 Nov 1;57(21):4838-48.
[2]. Ali S, et al. Apoptosis-inducing effect of erlotinib is potentiated by 3,3'-diindolylmethane in vitro and in vivo using an orthotopic model of pancreatic cancer. Mol Cancer Ther, 2008, 7(6), 1708-1719.
[3]. Marchetti S, et al. Effect of the ATP-binding cassette drug transporters ABCB1, ABCG2, and ABCC2 on erlotinib hydrochloride (Tarceva) disposition in in vitro and in vivo pharmacokinetic studies employing Bcrp1-/-/Mdr1a/1b-/- (triple-knockout) and wild-type mice.Mol Cancer Ther. 2008 Aug;7(8):2280-7.
[4]. Adachi K, et al. Effects of erlotinib on lung injury induced by intratracheal administration of bleomycin (BLM) in rats. J Toxicol Sci. 2010 Aug;35(4):503-14.
[相关活性小分子]