ROC-325

ROC-325 是一种新型的自噬抑制剂。

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研究领域 >> 癌症

Autophagy[1]

ROC-325是一种新的自噬抑制剂。用ROC-325处理导致吖啶橙荧光的显着损失。 ROC-325引发组织蛋白酶D(CTSD)水平的显着增加。 ROC-325处理产生与抑制自噬一致的药效学效应。用5μMROC-325处理24小时导致LC3B斑点的形成和A498和786-0 RCC细胞中LC3B水平的强烈增加。在A498和786-0细胞中进行的免疫印迹分析表明,ROC-325以与p62和组织蛋白酶D水平的相应增加相关的方式促进LC3B表达的剂量依赖性增加[1]。

ROC-325治疗导致疾病进展的显着的剂量依赖性抑制。 ROC-325具有良好的耐受性,除了在最高剂量下非常适度,非显着的平均体重降低外,没有观察到显着的毒性。从用ROC-325处理的动物收集的标本的免疫组织化学分析表明自噬标记物LC3B和p62显着的剂量依赖性增加并且增加细胞凋亡[1]。

将肾癌细胞与ROC-325一起温育24小时。收获细胞，然后裂解。将来自每个样品的约50μg总细胞蛋白质进行SDS-PAGE，将蛋白质转移至硝酸纤维素膜，并在含有0.1％Tween-20的Tris缓冲盐水溶液中用5％脱脂牛奶封闭膜1小时。然后将印迹在4℃下用一抗探测过夜，洗涤，并用与辣根过氧化物酶偶联的物种特异性二抗进行探测。免疫反应物质通过增强化学发光检测[1]。

通过MTT测定估计细胞活力。将细胞以每孔10,000个细胞接种到96孔微量培养板中并使其附着24小时。然后用ROC-325处理细胞72小时。在ROC-325处理后，加入MTT并使用酶标仪定量甲forma吸光度。通过将相应的甲forma光密度归一化至对照细胞的密度来计算每个实验条件下估计的细胞活力。体外ROC-325暴露后的促凋亡作用通过碘化丙啶（PI）染色和亚G0 / G1 DNA含量的荧光激活细胞分选（FACS）分析以及通过使用商业流式细胞术测量活性胱天蛋白酶-3来量化。试剂盒[1]。

将786-0肾癌细胞（5×106）悬浮于HBSS和Matrigel的混合物中，并皮下植入雌性裸鼠中。将来自每个细胞系异种移植物的携带肿瘤的动物随机分成治疗组。用载体（水），ROC-325（25,40和50mg / kg PO）QD×5处理小鼠6周。每天监测小鼠并每周测量肿瘤体积两次。在研究完成时，从每组中切除来自代表性动物的肿瘤，福尔马林固定和石蜡包埋用于免疫组织化学分析[1]。

[1]. Carew JS, et al. Disruption of Autophagic Degradation with ROC-325 Antagonizes Renal Cell Carcinoma Pathogenesis. Clin Cancer Res. 2017 Jun 1;23(11):2869-2879.

雷帕霉素 | 蛋白酶体抑制剂 | 放线菌酮 | 3-甲基腺嘌呤 | LY294002 | 瑞沙托维 | (+)-JQ1 | 4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑 | 吡唑蒽酮(SP600125) | U0126-EtOH | 放线菌素D | 磷酸氯喹 | CHIR-99021 (CT99021) | MK-2206 2HCl | Dorsomorphin dihydrochloride