N-[2,5-二氟-4-[[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-吡啶基]氧基]苯基]-N'-苯基-1,1-环丙烷二甲酰胺

c-Kit-IN-1 是一种有效的 c-Kit 和 c-Met 抑制剂,IC50 值 <200 nM。

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> c-Kit

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> c-Met的/HGFR

研究领域 >> 癌症

IC50: <200 nM (c-Met), <200 nM (c-Kit), <2 μM (KDR), <10 μM (PDGFRα), <10 μM (PDGFRβ)[1]

c-Kit-IN-1是从专利2010051373A1(化合物实施例45)中提取的c-Kit和c-Met抑制剂,其IC 50 <200nM。 c-Kit-IN-1还抑制KDR,PDGFRα和β,IC50分别<2μM,<10μM和<10μM[1]。

通过与丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶系统偶联从激酶反应产生ADP来确定c-KIT激酶的活性。在该测定中，通过分光光度法连续监测NADH的氧化（因此在A340nm处的降低）。反应混合物（100μL）含有c-KIT（cKIT残基T544-V976，来自ProQinase，5.4 nM），polyE4Y（1 mg / mL），MgCl 2（10 mM），丙酮酸激酶（4单位），乳酸脱氢酶（0.7）单位），磷酸烯醇丙酮酸（1mM）和NADH（0.28mM）在含有0.2％辛基葡糖苷和1％DMSO，pH7.5的90mM Tris缓冲液中。将测试化合物（例如，c-Kit-IN-1）与c-KIT和其他反应试剂在22℃温育<2分钟，然后加入ATP（200μM）以开始反应。在Polarstar Optima读板仪（BMG）上在30℃下连续监测340nm处的吸收0.5小时。使用0至0.5小时的时间范围计算反应速率。通过比较反应速率与对照（即没有测试化合物）的反应速率获得抑制百分比。使用在GraphPad Prism软件包[1]中实施的软件程序，从一系列抑制剂浓度下测定的一系列抑制百分比值计算IC 50值。

将测试化合物（例如，c-Kit-IN-1）的连续稀释液分配到96孔黑色透明底板中。对于每种细胞系，在200μL完全生长培养基中每孔加入五千个细胞。将板在37摄氏度，5％CO 2,95％湿度下孵育67小时。在温育期结束时，向每个孔中加入40μL的440μM刃天青在PBS中的溶液，并在37摄氏度，5％CO 2,95％湿度下再温育5小时。使用540nM的激发和600nM的发射在Synergy2读数器上读板。使用Prism软件分析数据以计算IC 50值[1]。

[1]. Daniel L. Flynn, et al. Cyclopropane amides and analogs exhibiting anti-cancer and anti-proliferative activities. WO 2010051373 A1

吡昔替尼 | 苯扎米特 | Foretinib | PHA-665752 | 马赛替尼 | BMS 777607 | SU14813 | 益智二肽 | 多韦替尼 | 沃利替尼 | 司曲替尼 | (3R,4R)-3-(5,6-二氢-4H-吡咯并[3,2,1-IJ]喹啉-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)吡咯烷-2,5-二酮 | 特泊替尼 | 美乐替尼 | 6-[[6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1,2,4-噻唑并[4,3-b]吡嗪-3-基]硫代]喹啉