| 描述 |
Arginase inhibitor 1 是一种有效的人精氨酸酶 (arginases I 和 II)抑制剂,IC50 分别为 223 和 509 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 223 nM (arginases I), 509 nM (arginases II)[1]
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| 体外研究 |
精氨酸酶抑制剂1抑制人精氨酸酶I和II,IC50分别为223±22.3和509±85.1nM,并且在过量表达人精氨酸酶I(CHO细胞)的重组细胞试验中具有活性。精氨酸酶抑制剂1是新型第二代精氨酸酶抑制剂,在心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)的大鼠模型中具有显着活性。在体外酶和细胞测定中,精氨酸酶抑制剂1对hARG I有效。精氨酸酶抑制剂1的IC50在过表达hArgI的CHO细胞中为8μM[1]。
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| 体内研究 |
在雄性Sprague-Dawley大鼠(每剂量途径n = 3)中静脉内(iv)和口服(po)给药后进行精氨酸酶抑制剂1的药代动力学评价。将精氨酸酶抑制剂1配制在0.9％盐水中,并通过预灌注套管以1mL/kg的剂量静脉内以10mg/kg静脉内施用,并通过管饲法以2mg/kg的剂量口服10mg/kg。公斤。静脉注射给予禁食动物10 mg/kg后,精氨酸酶抑制剂1的终末消除半衰期(t1/2)为3.3 h,分布容积和全身清除率为1.86 L/kg和7.89 mL/min/kg , 分别。精氨酸酶抑制剂1(10 mg/kg,po)的口服生物利用度为28％,Cmax为0.45 mg/L [1]。
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| 激酶实验 |
纯化的重组全长人精氨酸酶I蛋白和重组的，完全活性的截短形式的人精氨酸酶II用于开发96孔板人精氨酸酶I和精氨酸酶II测定。用程序化合物抑制精氨酸酶I和精氨酸酶II，用分光光度法在530nm处进行。待测试的精氨酸酶抑制剂1以比其在比色杯中的最终浓度大50倍的初始浓度溶解在DMSO中。将10微升储备溶液稀释于90μL含有0.1M磷酸钠缓冲液的测定缓冲液中，所述缓冲液含有130mM NaCl，pH7.4，向其中加入浓度为1mg / mL的卵白蛋白（OVA）。精氨酸酶I和II的溶液在含有1mg / mL OVA的100mM磷酸钠缓冲液（pH7.4）中制备，得到终浓度为100ng / mL的精氨酸酶原液。向96孔微量滴定板的每个孔中加入40μL酶，10μL精氨酸酶抑制剂1溶液和10μL酶底物溶液（L-精氨酸+硫酸锰）。对于用作阳性对照的孔，仅加入酶及其底物，而用作阴性对照的孔仅含有硫酸锰。将微量滴定板在37℃温育60分钟后，将通过组合等比例（1：1）试剂A和B得到的150μL尿素试剂加入微量滴定板的每个孔中以终止反应。尿素试剂在使用前通过将试剂A（10mM邻苯二甲醛和0.4％聚氧乙烯十二烷基醚（w / v）在1.8M硫酸中）与试剂B（1.3mM伯氨基二磷酸，0.4％聚氧乙烯月桂基醚（ w / v）和在3.6M硫酸中的130mM硼酸）。淬灭反应混合物后，将微量滴定板在室温下再静置10分钟以使颜色显色。通过测量530nm处反应混合物的光密度（OD）并将OD值归一化至对照中观察到的抑制百分比来计算精氨酸酶的抑制。然后使用归一化的OD通过将归一化的OD值与log [浓度]作图并使用回归分析来计算IC 50值来产生浓度 - 响应曲线[1]。
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| 动物实验 |
大鼠[1]通过静脉内推注（iv）和口服（po）给药在雄性Sprague-Dawley大鼠中评估单剂量药代动力学。每个剂量组评估三只大鼠。精氨酸酶抑制剂1在给药前新鲜配制在0.9％盐水中，10mg / mL静脉给药，剂量体积为1mL / kg动物体重，5mg / mL用于剂量体积为2的剂量给药。毫升/千克。在给药前将动物禁食过夜，随意给予水。精氨酸酶抑制剂1通过预植入的套管静脉内施用或通过管饲法口服施用。在给药后4小时将食物重新引入动物。通过预植入的套管（用于静脉内给药的双插管动物;与剂量插管分开的血液收集）以每次0.25mL收集血液样品，然后用0.9％盐水替换体积。在给药后，在给药前0.083（仅静脉注射），0.25,0.5,1,2,4,6,8和24小时收集样品。将血液样品保持在冰上并以10000g离心以获得血浆。在分析之前将血浆在-20℃冷冻。使用Agilent 1100 HPLC泵通过LC / MS / MS进行分析，并在PESciex API 4000 Qtrap上进行检测。使用Phoenix WinNonlin软件中的标准非房室分析进行药代动力学评估。
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| 参考文献 |
[1]. Van Zandt MC, et al. Discovery of (R)-2-amino-6-borono-2-(2-(piperidin-1-yl)ethyl)hexanoic acid and congeners as highly potentinhibitors of human arginases I and II for treatment of myocardial reperfusion injury. J Med Chem. 2013 Mar 28;56(6):2568-80.
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