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(3E,5E)-3,5-二[(4-硝基苯基)亚甲基]-1-(1-氧代-2-丙烯-1-基)-4-哌啶酮

用途

b-AP15 特异性抑制去泛素化酶 (deubiquitinating) UCHL5 和 Usp14活性。

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名称

[ CAS 号 ]:
1009817-63-3

[ 中文名 ]:
(3E,5E)-3,5-二[(4-硝基苯基)亚甲基]-1-(1-氧代-2-丙烯-1-基)-4-哌啶酮

[ 英文名 ]:
NSC 687852

[英文别名 ]:

S4920
b-AP15

生物活性

[ 描述 ]:

b-AP15 特异性抑制去泛素化酶 (deubiquitinating) UCHL5 和 Usp14活性。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 去泛素化酶

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

UCHL5/Usp14[1]

[体外研究]

用指定浓度的b-AP15处理纯化的19S蛋白酶体(5nM),通过检测Ub-AMC切割确定DUB活性。使用非线性回归分析从Graph Pad Prism中的对数浓度曲线确定IC 50值(2.1±0.411μM)。 b-AP15作为先前未鉴定的一类蛋白酶体抑制剂,其废除了19S调节颗粒的去泛素化活性。 b-AP15抑制两种19S调节颗粒相关的去泛素化酶,遍在蛋白C-末端水解酶5(UCHL5)和遍在蛋白特异性肽酶14(USP14)的活性,导致多聚泛蛋白的积累。 b-AP15诱导的肿瘤细胞凋亡对TP53状态不敏感,凋亡抑制因子BCL2过表达[1]。使用Ub-AMC作为底物,确定b-AP15的能力抑制蛋白酶体脱遍在蛋白酶活性。观察到IC50为16.8±2.8μM[2]。 b-AP15是一种特异性的USP14和UCHL5抑制剂,可阻断MM细胞的生长并诱导细胞凋亡[3]。

[体内研究]

b-AP15(2.5mg/kg)抑制同系小鼠模型中的肿瘤生长,其给药时间表较少。我们使用2-d-on,2-d-off计划对患有Lewis肺癌(LLCs)的C57BL/6J小鼠施用b-AP15,并使用1-d-给予具有原位乳腺癌(4T1)的BALB/c小鼠。三维计划表。 b-AP15在两种模型中显着抑制肿瘤生长,对于C57BL/6J小鼠,T/C = 0.16(P≤0.01),对于BALB/c小鼠,T/C = 0.25(P≤0.001)。在用b-AP15治疗的4T1乳腺癌小鼠组中也观察到肺转移灶数量的减少[1]。

[激酶实验]

对于去泛素化酶抑制测定，19S调节颗粒（5nM），26S（5nM）UCH-L1（5nM），UCH-L3（0.3nM），USP2CD（5nM）USP7CD（5nM）USP8CD（5nM）或将BAP1（5nM）与DMSO或b-AP15一起温育，并使用Wallac VICTOR Multilabel计数器或配备有380nm激发和460nm发射滤光器的Tecan Infinite M1000监测遍在蛋白-AMC（1,000nM）的切割[1]。

[细胞实验]

通过荧光微量培养细胞毒性测定或MTT测定监测细胞活力。对于MTT测定，将细胞接种到96孔平底板中过夜并暴露于药物，使用DMSO作为对照。在孵育结束时，向每个孔中加入10μl5mg/ mL MTT的储备溶液，并将板在37℃下孵育4小时。将Formazan晶体用100μL10％SDS / 10mM HCl溶液在37℃下溶解过夜。使用酶联免疫吸附测定（ELISA）读板仪在590nm处测量吸光度[2]。

[动物实验]

小鼠[1]对于鳞状细胞癌模型，将1×106个FaDu细胞皮下注射到雌性SCID小鼠的右后腹侧。通过公式长度×宽度2×0.44测量肿瘤生长。当肿瘤长到大约200 mm3（定义为第0天）时，小鼠随机接受每日皮下5 mg / kg体重的载体（n = 10）或b-AP15（n = 15）注射。对于结肠癌模型，我们将过量表达Bcl2的2.5×106 HCT-116结肠癌细胞皮下注射到雌性裸鼠的右侧。我们通过腹膜内注射给予小鼠每kg体重5mg b-AP15。对于肺癌模型，我们将2×105 LLC细胞皮下注射到雌性C57 / B6小鼠的右后侧。当肿瘤生长到大约50 mm3（定义为第0天）时，我们将小鼠随机分组接受载体（n = 4）或b-AP15（n = 4），腹腔注射5 mg / kg体重，治疗周期包括2天治疗，然后休息2天（2天开，2天关闭），持续2周。

[参考文献]

[1]. D'Arcy P, et al. Inhibition of proteasome deubiquitinating activity as a new cancer therapy. Nat Med. 2011 Nov 6;17(12):1636-40.

[2]. Wang X, et al. The 19S Deubiquitinase Inhibitor b-AP15 is Enriched in Cells and Elicits Rapid Commitment to Cell Death. Mol Pharmacol. 2014 Jun;85(6):932-45.

[3]. Tian Z, et al. A novel small molecule inhibitor of deubiquitylating enzyme USP14 and UCHL5 induces apoptosis in multiple myeloma and overcomes bortezomib resistance. Blood. 2014 Jan 30;123(5):706-16.

[相关活性小分子]

BAY 11-7082 | P005091 | 2,6-二氨基-3,5-二硫氰基吡啶 | VLX1570 | (2E)-3-(6-溴-2-吡啶基)-2-氰基-N-[(1S)-1-苯基丁基]-2-丙烯酰胺 | 1-[5-[(2,4-二氟苯基)硫基]-4-硝基-2-噻吩基]乙酮 | 的DUB-IN-2 | ML364 | GEN6776 | ML-323 | HBX 19818 | 1-[1-(4-氟苯基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-基]-2-(1-吡咯烷基)乙酮 | LDN-57444 | 4-氰基-5-[(3,5-二氯-4-吡啶基)硫基]-N-[4-(甲基磺酰基)苯基]-2-噻吩甲酰胺

物理化学性质

[ 密度 ]:
1.4±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
670.4±55.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₂₂H₁₇N₃O₆

[ 分子量 ]:
419.387

[ 闪点 ]:
359.3±31.5 °C

[ 精确质量 ]:
419.111725

[ PSA ]:
129.02000

[ LogP ]:
4.24

[ 蒸汽压 ]:
0.0±2.0 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.702

[ 储存条件 ]:
2~8°C，密封

(3E,5E)-3,5-二[(4-硝基苯基)亚甲基]-1-(1-氧代-2-丙烯-1-基)-4-哌啶酮

用途

名称

生物活性

物理化学性质

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