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VLX1570

VLX1570用途

VLX1570 是 b-AP15 的类似物，为一种竞争性的去泛素化酶 deubiquitinase 抑制剂，IC₅₀ 值约为 10 μM。

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VLX1570名称

[ CAS 号 ]:
1431280-51-1

[ 中文名 ]:
VLX1570

[ 英文名 ]:
VLX1570

[英文别名 ]:

VLX1570

VLX1570生物活性

[ 描述 ]:

VLX1570 是 b-AP15 的类似物,为一种竞争性的去泛素化酶 deubiquitinase 抑制剂,IC50 值约为 10 μM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 去泛素化酶

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

IC50: appr 10 μM (Deubiquitinase)[2]

[体外研究]

VLX1570抑制19S调节颗粒的USP14和UCHL5活性,USP14的抑制作用更明显。 VLX1570(1μM)显示对KMS-11骨髓瘤细胞中USP14的抑制活性。 VLX1570在HCT116细胞上的IC50为0.58μM[1]。 VLX1570使用两种不同的重组蛋白来源与重组USP14结合,Kd为1.5-18μM,与USP14相比,重组UCHL5的Kd更高(14-18μM)。 VLX1570对多发性骨髓瘤细胞具有有效的抗增殖活性,对于KMS-11,RPMI8226,OPM-2和OPM-2-BZR,IC50分别为43±2 nM,74±2 nM,126±3 nM和191±1 nM细胞分别为[2]。 VLX1570抑制BCWM.1细胞的活力,EC50为20.22 nM。 VLX1570(100,250,500 nM)在所有测试的Waldenstrom巨球蛋白血症(WM)细胞系中以剂量依赖性方式诱导12小时显着凋亡,包括BCWM.1/IR(IR)和BCWM.1/BR(BR)亚克隆。 VLX1570(100,250,500 nM)也会在WM细胞中引起ER应激机制和线粒体损伤。 VLX1570(250 nM)下调BCR信号体组分及其末端效应子,以及WM细胞中CXCR4的表达[3]。

[体内研究]

VLX1570(3 mg/kg)显着降低携带KMS-11多发性骨髓瘤细胞的小鼠的肿瘤生长[2]。 VLX1570(4.4 mg/kg,ip)显着抑制肿瘤生长,在Waldenstrom巨球蛋白血症(WM)小鼠中没有明显的体重减轻和其他全身毒性迹象[3]。

[激酶实验]

26S蛋白酶体（1 nM）的制备用DMSO，VLX1570或b-AP15在测定缓冲液（25mM Tris，5mM MgCl 2,10％甘油，0.05mg / mL BSA，2mM ATP和1）中预处理2分钟。加入Ubrhodamine之前的mM DTT）。使用Ex / Em = 490nm / 520nm在37℃下监测荧光，使用TECAN infinite 200仪器每10秒读取数据30分钟。对于KMS11细胞的UbVS标记，在冰上用缓冲液（50mM HEPES pH 7.4,250mM蔗糖，10mM MgCl 2,2mM ATP，1mM DTT）从对照或处理的细胞中裂解细胞沉淀30分钟并除去碎片通过离心。将25μg蛋白质用1μMUbVS在37℃标记30分钟。通过SDS-PAGE分离样品并进行免疫印迹。对于蛋白酶体的UbVS标记，纯化的19S蛋白酶体（50 nM）在室温下用DMSO，VLX1570或b-AP15（50μM）预处理10分钟，然后用1μMHA-UbVS在37°标记30分钟C和免疫印迹[1]。

[细胞实验]

通过MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑）测定法监测细胞活力。对于MTT测定，将细胞悬浮于5×10 5个细胞/ mL，并将100μL等分试样分配到96孔微量滴定板中，并使用DMSO作为对照暴露于药物。在孵育结束时，向每个孔中加入10μL5mg/ mL MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物）的储备溶液，并且在37℃下孵育4小时。将Formazan晶体用100μL10％SDS / 10mM HCl溶液在37℃下溶解过夜。由于MTT测定受线粒体活性影响，并且由于OXPHOS受VLX1570影响，因此酸性磷酸酶方法49用于在一些实验中测定细胞活力。用PBS洗涤两次后，将细胞在100μL的0.1M乙酸钠，0.1％Triton X-100，对硝基苯基磷酸盐中裂解，并在37℃下孵育90分钟。在孵育结束时，向每个孔中加入10μLNaOH并测定A405 [2]。

[动物实验]

以每组7个样本大小，5％显着性水平的80％功率进行动物实验，以检测两组之间1800平方米的平均值差异。对于IgM相对于基线的百分比变化，每组样本量为7，计算5％显着性水平的80％功率以检测两组之间450％的平均值差异。将14只雌性NOD / SCID小鼠（6-8周龄）皮下植入1×106荧光素酶标记的RPCI-WM1细胞（Luc-RPCI-WM1），使其生长直至通过IVIS成像观察生物发光信号（第20天）。在第21天，将小鼠随机分成2组（每组n = 7），一组接受载体（cremaphor + PEG + Tween），另一组通过腹膜内注射接受4.4mg / kg的VLX1570。调查员对小组分配不了解。两组分别每隔一天用载体或VLX1570处理22天。使用直接卡尺测量每3-4天测量肿瘤的大小，并使用公式（宽度）2×长度/ 2计算肿瘤的体积。在肿瘤植入后第0,20,30,36和43天用Xenogen成像系统进行生物发光肿瘤成像。通过下颌下静脉穿刺在同一天收集来自小鼠的血液，随后使用ELISA分离血清以定量人IgM水平。在第44天，处死小鼠，并在对照和治疗组中测量最终肿瘤体积。所有图像均使用佳能D40数码相机获得。没有使用包含/排除的特定标准，因为所有小鼠都形成肿瘤，因此被纳入研究[3]。

[参考文献]

[1]. Wang X, et al. Synthesis and evaluation of derivatives of the proteasome deubiquitinase inhibitor b-AP15. Chem Biol Drug Des. 2015 Nov;86(5):1036-48.

[2]. Wang X, et al. The proteasome deubiquitinase inhibitor VLX1570 shows selectivity for ubiquitin-specific protease-14 and induces apoptosis of multiple myeloma cells. Sci Rep. 2016 Jun 6;6:26979.

[3]. Paulus A, et al. Coinhibition of the deubiquitinating enzymes, USP14 and UCHL5, with VLX1570 is lethal to ibrutinib- or bortezomib-resistant Waldenstrom macroglobulinemia tumor cells. Blood Cancer J. 2016 Nov 4;6(11):e492.

[相关活性小分子]