1-[5-[(2,4-二氟苯基)硫基]-4-硝基-2-噻吩基]乙酮

P 22077 是一种泛素蛋白特异性蛋白酶 (USP7) 抑制剂,EC50 值为 8.01 μM,同时可抑制 USP47,EC50 值为 8.74 μM。

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 去泛素化酶

研究领域 >> 癌症

EC50: 8.01 μM (USP7), 8.74 μM (USP47)[1]

P 22077是USP7和DUB USP47的抑制剂,EC50分别为8.01μM和8.74μM。 P 22077(15-45μM)抑制了更小的DUB子集。 P 22077(25μM)在HEK293T细胞中引起DUB抑制[1]。 P 22077(0-20μM)大大降低神经母细胞瘤(NB)细胞的细胞活力,包括IMR-32,NGP,CHLA-255和SH-SY5Y细胞,但没有NB-19和SK-N-AS细胞。 P 22077(10μM)增加p53活性并诱导p53野生型和表达HDM2的NB细胞中的细胞凋亡。 P 22077(5μM)增强Dox和VP-16对NB细胞的细胞毒作用,并增强Dox-和VP-16诱导的p53介导的细胞凋亡[2]。

P 22077(15mg/kg,ip 21天)在携带IMR-32衍生的肿瘤的异种移植小鼠模型中显示出有效的抗肿瘤活性。 P 22077在携带SH-SY5Y的肿瘤小鼠中以10 mg/kg处理14天后也表现出抗肿瘤作用,在携带NGP衍生肿瘤的小鼠中以20 mg/kg处理12天[2]。

产生重组全长USP7，USP2核心，USP5，JOSD2，DEN1，PLpro核心和SENP2催化核心。氨基末端His6标记的USP4，USP8，USP28，UCH-L1，UCH-L3，UCH-L5和MMP13在大肠杆菌中表达。 N末端His6标记的USP15，USP20和USP47在Sf9细胞中表达。通过色谱法纯化所有重组蛋白。氨基末端标记His6 Ub-PLA2（Ub-CHOP），SUMO3-PLA2（SUMO3-CHOP），ISG15-PLA2（ISG15-CHOP），NEDD8-PLA2（NEDD8-CHOP），Ub-EKL（Ub-CHOP2），和制备游离的催化活性PLA2 [1]。

使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8，WST-8 [2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺基苯基））评估细胞活力测定-2H-四唑鎓，单钠盐]）。将细胞以每孔1×104的密度接种在96孔平底板中。在37℃温育24小时后，将增加浓度的P 22077，Dox，VP-16或它们的组合加入孔中。二十四小时后，向每个孔中加入10μLCCK-8，孵育1小时后，使用酶标仪在450nm处测量吸光度。每个实验以六个重复进行。仅使用介质的背景读取来标准化结果[2]。

原位神经母细胞瘤（NB）小鼠模型用于测定。简而言之，将具有荧光素酶表达的1.5×106个人IMR-32，SH-SY5Y或NGP细胞手术注射到5周龄雌性NCR裸鼠的左肾囊中。使IMR-32，SH-SY5Y和NGP衍生的异种移植物生长〜2-3周，然后将小鼠随机分为对照组和P 22077治疗组。每组由三只或六只小鼠组成。每天通过腹膜内（ip）注射用DMSO或P 22077处理动物12,14或21天。在实验结束时，所有小鼠都被杀死。肿瘤和右侧控制肾脏被切除，称重和拍照[2]。

[1]. Altun M, et al. Activity-based chemical proteomics accelerates inhibitor development for deubiquitylating enzymes. Chem Biol. 2011 Nov 23;18(11):1401-12.

[2]. Fan YH, et al. USP7 inhibitor P22077 inhibits neuroblastoma growth via inducing p53-mediated apoptosis. Cell Death Dis. 2013 Oct 17;4:e867.

BAY 11-7082 | P005091 | 2,6-二氨基-3,5-二硫氰基吡啶 | VLX1570 | (2E)-3-(6-溴-2-吡啶基)-2-氰基-N-[(1S)-1-苯基丁基]-2-丙烯酰胺 | 的DUB-IN-2 | ML364 | (3E,5E)-3,5-二[(4-硝基苯基)亚甲基]-1-(1-氧代-2-丙烯-1-基)-4-哌啶酮 | GEN6776 | ML-323 | HBX 19818 | 1-[1-(4-氟苯基)-2,5-二甲基-1H-吡咯-3-基]-2-(1-吡咯烷基)乙酮 | LDN-57444 | 4-氰基-5-[(3,5-二氯-4-吡啶基)硫基]-N-[4-(甲基磺酰基)苯基]-2-噻吩甲酰胺