Agerafenib

CEP-32496 是一种口服高效的 BRAFV600E 抑制剂,Kd 为 14 nM。

信号通路 >> MAPK/ERK信号通路 >> 拉夫

研究领域 >> 癌症

BRafV600E:14 nM (Kd)

Braf:36 nM (Kd)

CRAF:39 nM (Kd)

c-Kit:2 nM (Kd)

Ret:2 nM (Kd)

LCK:2 nM (Kd)

Abl-1:3 nM (Kd)

VEGFR-2:8 nM (Kd)

CSF-1R:9 nM (Kd)

EPHA2:14 nM (Kd)

EGFR:22 nM (Kd)

c-Met:513 nM (Kd)

JAK-2:4700 nM (Kd)

MEK-1:7100 nM (Kd)

MEK-2:8300 nM (Kd)

CEP-32496对几种BRAFV600E依赖性细胞系具有高效力,对表达突变型BRAFV600E的肿瘤细胞系与含有野生型BRAF的肿瘤细胞系具有选择性细胞毒性。 CEP-32496表现出有效的结合(BRAFV600E Kd = 14nM)和细胞活性(pMEK IC50 = 82nM和A375增殖IC50 = 78nM),在增殖试验中具有活性。 CEP-32496也表现出有利的CYP450抑制谱,与CYP1A2,CYP2C9,CYP2D6和CYP3A4同种型相比,测得的IC50值大于10μM,与CYP2C19相比,IC50 =3.4μM[1]。

向携带Colo-205肿瘤异种移植物的小鼠口服施用CEP-32496导致肿瘤细胞裂解物中pMEK的显着抑制。例如,单次30 mg/kg(po)剂量的CEP-32496分别在给药后2小时和6小时时对肿瘤裂解物中标准化pMEK的抑制率达到50％和75％(p <0.03),而施用后2至10小时,55mg/kg(口服)剂量导致pMEK的75％至57％(p <0.03)抑制,24小时归一化至基线。 CEP-32496在小鼠,狗和食蟹猴中表现出特殊的PK特征。将CEP-32496给予比格犬(单剂量1mg/kg静脉内和10mg/kg口服)导致低清除率(CL = 5.0(mL/min)/ kg)和优异的生物利用度(％F = 100)。类似地,在食蟹猴中,施用CEP-32496(单剂量1mg/kg静脉注射和10mg/kg口服)由于低清除率(CL = 6.7mL/min/kg)和优异的生物利用度导致高口服暴露。 (％F = 100)[1]。

进行KINOMEscan竞争结合测定。产生的激酶在T7噬菌体上展示或通过在HEK-293细胞中表达并用DNA标记。结合反应在室温下进行1小时，未与测试化合物（例如，CEP-32496）结合的激酶部分通过用固定的亲和配体捕获并通过定量PCR定量来确定。针对每种化合物单独测试每种激酶。使用11次连续3倍稀释测定Kd值，并以一式两份进行的实验的平均值表示。个体值之间的差异小于2倍[1]。

将A375细胞以每孔10,000个细胞接种于含有10％胎牛血清的DMEM中并使其附着。用PBS洗涤细胞并转换成含有0.5％血清的DMEM并孵育过夜。然后以各种浓度加入测试化合物（例如，CEP-32496;10μM），最终DMSO浓度为0.5％并孵育72小时。在孵育结束时，按说明添加细胞滴度蓝，并继续孵育3小时。通过使用SoftMax Pro（560nm激发和590nm发射）测量荧光信号的强度来定量剩余的活细胞。使用9点曲线得出IC 50值，并且表示为一式两份进行的实验的平均值[1]。

小鼠[1]在右侧腹侧接种6至8周龄无胸腺nu / nu裸鼠（20-25g）的Colo-205肿瘤细胞（1×106 /小鼠）。在达到150-200mm 3的平均肿瘤体积（植入后10-12天）后，将动物随机分成治疗组（n = 10只小鼠/组）。每组仅用载体（22％HPβCD）或CEP-32496以10,30或100mg / kg每日两次（BID）口服给药14天，并且每剂量的药物以0.1的体积给药。每20g体重的mL，根据动物的体重进行调整。使用游标卡尺每周测量肿瘤体积三次，并计算体积[1]。

[1]. Rowbottom MW, et al. Identification of 1-(3-(6,7-dimethoxyquinazolin-4-yloxy)phenyl)-3-(5-(1,1,1-trifluoro-2-methylpropan-2-yl)isoxazol-3-yl)urea hydrochloride (CEP-32496), a highly potent and orally efficacious inhibitor of V-RAF murine sarcoma viral oncogene homologue B1 (BRAF) V600E.

PLX8394 | 多马莫德 | PLX-4720 | Encorafenib | LY3009120 | GW 5074 | RAF265 | 3-(1-氰基-1-甲基乙基)-N-[3-[(3,4-二氢-3-甲基-4-氧代-6-喹唑啉基)氨基]-4-甲基苯基]苯甲酰胺 | RAF709 | GDC-0879 | LXH254 | TAK-632 | PLX7904 | HG6-64-1 | Ro 5126766