1-(3-羟基苄基)-3-[4-(吡啶-4-基)噻唑-2-基]脲

RKI-1447是高效的ROCK1和ROCK2的小分子抑制剂,IC50值分别为14.5 nM 和6.2 nM。

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研究领域 >> 癌症

ROCK2:6.2 nM (IC50)

ROCK1:14.5 nM (IC50)

RKI-1447是I型激酶抑制剂,其通过与铰链区和DFG基序的相互作用结合ATP结合位点。 RKI-1447抑制人癌细胞中ROCK底物mLC-2和MYPT-1的磷酸化,但在高达10μM的浓度下对AKT,MEK和S6激酶的磷酸化水平没有影响。 RKI-1447在抑制ROCK介导的细胞骨架重组方面也具有高度选择性。 RKI-1447抑制乳腺癌细胞的迁移,侵袭和不依赖贴壁的肿瘤生长[1]。

RKI-1447在转基因小鼠模型中非常有效地抑制乳腺肿瘤的生长。 RKI-1447抑制乳腺肿瘤生长87％,并且与来自用载体对照处理的小鼠的肿瘤相比,来自RKI-1447处理的小鼠的乳腺肿瘤平均小7.7倍[1]。

在三个不同的日子测试化合物，一式两份进行8点稀释以确定平均IC 50值。将测定条件优化至15μL激酶反应体积，其中5ng酶在50mM HEPES（pH 7.5），10mM MgCl 2,1mM EGTA和0.01％Brij-35中。将反应物在室温下在1.5μM肽底物和12.5μMATP（对于ROCK1）或2μM具有50μMATP的底物（对于ROCK2）的存在下孵育1小时。然后停止反应，通过仅选择性切割未磷酸化的肽来确定磷酸化与未磷酸化肽的比例。测量445nm和520nm处的信号的比率。使用GraphPad Prism 5软件[1]使用拟合曲线确定IC 50值。

将NIH 3T3细胞以8000个细胞/孔接种在无血清培养基中的8室载玻片中24小时，并用载体，1μMRKI-1447或1μMRKI-1313处理1小时。然后用完全培养基，10μMLPA，200ng / mL缓激肽或30ng / mL PDGF刺激细胞30分钟。刺激后，将细胞固定在4％多聚甲醛中并用Texas-Red Phalloidin染色。然后加入含有DAPI的培养基，每孔至少观察100个细胞[1]。

小鼠：用载体[20％-2-羟丙基-β-环糊精（HPCD）]或溶于新制备的HPCD中的200mpk RKI-1447每天腹膜内处理MMTV / neu转基因小鼠14天。基于治疗最后一天的肿瘤体积（Vf）相对于治疗开始当天（V0）计算体积百分比变化。然后计算每个治疗组的肿瘤体积的平均百分比变化[1]。

[1]. Patel RA, et al. RKI-1447 is a potent inhibitor of the Rho-associated ROCK kinases with anti-invasive and antitumor activities in breast cancer. Cancer Res. 2012 Oct 1;72(19):5025-34.

Y-27632 2HCl | 盐酸法舒地尔 | 2-[3-[4-[(1H-吲唑-5-基)氨基]喹唑啉-2-基]苯氧基]-N-异丙基乙酰胺 | 水仙环素 | Y-39983 HCl | Thiazovivin | GSK429286A | GSK180736A | GSK269962A | SR3677 | Azaindole 1 | 盐酸瑞舒地尔 | LX7101 | Chroman 1 | H-1152二盐酸盐