H-1152二盐酸盐

H-1152 dihydrochloride 是一种膜通透的,选择性的 ROCK 抑制剂,Ki 值为 1.6 nM,对 ROCK2 的 IC50 值为 12 nM。

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研究领域 >> 神经疾病

ROCKII:12 nM (IC50)

CaMKII:0.18 μM (IC50)

PKG:0.36 μM (IC50)

AuroraA:0.745 μM (IC50)

PKA:3.03 μM (IC50)

Src:3.06 μM (IC50)

PKC:5.68 μM (IC50)

Abl:7.77 μM (IC50)

MKK4:16.9 μM (IC50)

MLCK:28.3 μM (IC50)

EGFR:50 μM (IC50)

GSK3α:60.7 μM (IC50)

AMPK:100 μM (IC50)

P38α:100 μM (IC50)

H-1152二盐酸盐是Rho激酶的抑制剂,ROCK2的IC50为12 nM。 H-1152(H-1152P)对CaMKII,PKG,AuroraA,PKA,Src,PKC,MLCK,Abl,EGFR,MKK4,GSK3α,AMPK和P38α的抑制活性也较低,IC50分别为0.180,0.360,0.745,分别为3.03,3.06,5.68,28.3,7.77,50.0,16.9,60.7,100和100μM[1]。 H-1152有效抑制Rho激酶,Ki为1.6 nM,并略微抑制PKA,PKC和MLCK,Kis分别为0.63,9.27和10.1μM。 H-1152(0.1-10μM)高度抑制MARCKS磷酸化,在LPA处理的细胞中IC50值为2.5μM,但在PDBu处理的细胞中没有显示出这种明显的作用[2]。 H-1152(0.5-10μM)不会降低神经元存活率。 H-1152(1,5或10μM)也不会改变不同神经元形态的比例。此外,H-1152(10μM)增加BMP4和LIF培养物中的神经突长度[3]。

将抑制剂（包括H-1152）以指定浓度添加至50μL测定混合物50mM Tris-HCl（pH 7.5），5mM MgCl 2,1mM EDTA，1mM EGTA，1mM二硫苏糖醇，40μMSC-肽，各种浓度的[γ-32P] ATP和纯化的Rho-激酶。通过加入[γ-32P] ATP开始反应，并在30℃下进行5分钟。 Michaelis-Menten方程用于计算Rho激酶的米氏常数（Km）和最大速度（Vmax）。用二次图进一步分析数据以计算抑制常数（Ki）[2]。

简言之，将细胞常规涂布在聚-d-赖氨酸/层粘连蛋白包被的96孔板或16孔玻璃培养载玻片上。对照培养基含有Dulbecco改良的Eagles培养基/ Hams F12（1：1）（DMEM / F12），2mM L-谷氨酰胺，N 2混合物（1：100稀释），0.63mL 45％葡萄糖，每100mL DMEM / F12 ，神经营养蛋白3（NT3;终浓度，8 ng / mL），BDNF（终浓度8 ng / mL）和10％胎牛血清热量在使用前灭活。 LIF培养物含有对照培养基+ LIF（50ng / mL）。 BMP4培养物含有对照培养基+骨形态发生蛋白4（BMP4; 25ng / mL）。培养物总体积为110μL。将ROCK抑制剂H-1152在水中稀释，并在平板接种后24小时再加入10μL培养基中。将水加入对照中。加入抑制剂后18小时，将培养物在4％多聚甲醛中固定（室温下1小时用于过氧化物酶连接的标记，在室温下20分钟用于荧光标记）。对于ArrayScan / Cellomics自动分析：将细胞以50μL的总体积涂布在预先涂有聚-d-赖氨酸/层粘连蛋白的384孔塑料板上，并在相同的培养基中培养[3]。

[1]. Tamura M, et al. Development of specific Rho-kinase inhibitors and their clinical application. Biochim Biophys Acta. 2005 Dec 30;1754(1-2):245-52. Epub 2005 Sep 12.

[2]. Ikenoya M, et al. Inhibition of rho-kinase-induced myristoylated alanine-rich C kinase substrate (MARCKS) phosphorylation in human neuronal cells by H-1152, a novel and specific Rho-kinase inhibitor. J Neurochem. 2002 Apr;81(1):9-16.

[3]. Lie M, et al. Accelerated neurite growth from spiral ganglion neurons exposed to the Rho kinase inhibitor H-1152. Neuroscience. 2010 Aug 25;169(2):855-62.

Y-27632 2HCl | 盐酸法舒地尔 | 2-[3-[4-[(1H-吲唑-5-基)氨基]喹唑啉-2-基]苯氧基]-N-异丙基乙酰胺 | 水仙环素 | Y-39983 HCl | Thiazovivin | GSK429286A | GSK180736A | GSK269962A | SR3677 | Azaindole 1 | 盐酸瑞舒地尔 | 1-(3-羟基苄基)-3-[4-(吡啶-4-基)噻唑-2-基]脲 | LX7101 | Chroman 1