Pico145

Pico145 是一种高效的瞬时受体电位通道蛋白 1/4/5 (TRPC1/TRPC4/TRPC5) 抑制剂,在细胞中,能够抑制 (−)-englerin A 活化的 TRPC4/TRPC5 通道,IC50 值分别为 0.349 和 1.3 nM,对 TRPC3,TRPC6,TRPV1,TRPV4,TRPA1,TRPM2 和 TRPM8 无作用。

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IC50: 0.349 nM (TRPC4, cell assay), 1.3 nM (TRPC5, cell assay), 0.03 nM (TRPC4-TRPC1, cell assay), 0.2 nM (TRPC5-TRPC1, cell assay)[1]

Pico145(化合物31,C31)是TRPC1/4/5通道的显着小分子抑制剂,抑制(-)- englerin A激活的TRPC4/TRPC5通道,细胞中IC50分别为0.349和1.3 nM; Pico145对TRPC3,TRPC6,TRPV1,TRPV4,TRPA1,TRPM2,TRPM8没有影响。 Pico145还抑制在HEK 293 Tet +细胞中表达的人TRPC4-TRPC1和TRPC5-TRPC1多联体(分别为IC50,0.03nM和0.2nM)。通过增加(-)- englerin A浓度可以降低Pico145的效力。此外,Pico145有效抑制由鞘氨醇1-磷酸(S1P)激活的RPC4-TRPC1通道,并抑制S1P诱发的Ca2 +通过TRPC4-TRPC1通道进入,IC50为0.011 nM。 Pico145还对EA敏感的癌细胞系(Hs578T细胞)敏感(IC50,0.11nM)。 Pico145(100 nM)对存储操作的Ca2 +进入和组胺诱发的Ca2 +进入内皮细胞没有影响[1]。

在实验前24小时，将细胞以90％汇合接种到96孔透明底聚d-赖氨酸包被的黑色板中用于HEK 293细胞和用于A498细胞，Hs578T细胞和HUVEC的透明底Nunc板。 Fura-2 Ca2 +指示剂染料用于监测细胞内离子化Ca2 +浓度的变化。为了进行实验，将细胞与标准浴溶液（SBS）中的fura-2-AM（2μM）在37℃，0.01％pluronic酸存在下孵育1小时。 SBS含有135mM NaCl，5mM KCl，1.2mM MgCl 2,1.5mM CaCl 2,8mM葡萄糖和10mM Hepes（使用NaOH滴定pH至7.4）。随后，在进行Ca 2+测量之前，将细胞用SBS洗涤两次，然后加入Pico145或ML204 30分钟。使用96孔荧光板读数器记录fura-2荧光，激发波长为340和380nm。对于TRPV4记录，使用fluo-4 / AM代替fura-2 / AM，并且包括2.5mM丙磺舒以抑制fluo-4的泄漏。 Fluo-4在485nm激发，并且在525nm处收集发射的光。 Ca 2+由两个激发波长的荧光（F）发射强度的比率表示。测量在室温（21±3℃）下进行[1]。

[1]. Rubaiy HN, et al. Picomolar, selective, and subtype-specific small-molecule inhibition of TRPC1/4/5 channels. J Biol Chem. 2017 May 19;292(20):8158-8173.

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