PNU-159682

PNU-159682是一种高效的蒽环类新霉素代谢产物,具有突出的细胞毒性,是一种有效的 ADC细胞毒素。

信号通路 >> 抗体- 药物偶联物 >> ADC细胞毒素

研究领域 >> 癌症

PNU-159682抑制一组人肿瘤细胞系,IC70值在0.07-0.58 nM范围内,分别比MMDX和多柔比星的效力高2,360至790倍和6,420至2,100倍[1]。 PNU-159682(100μM)弱抑制拓扑异构酶II解除活性。 PNU-159682(10μM)-DNA加合物含有一个或两个与双链DNA结合的药物分子[2]。 PNU-159682对表达CAIX的SKRC-52细胞显示出细胞毒性作用,IC50为25 nM [3]。

PNU-159682(15μg/ kg,iv)显示在携带播散性小鼠L1210白血病的小鼠和4μg/ kg的MX-1人乳腺癌异种移植物中的抗肿瘤活性[1]。 PNU-159682(25 nmol/kg)在携带SKRC-52异种移植肿瘤的小鼠中表现出有效的抗肿瘤作用[3]。

通过利用该酶降解运动蛋白DNA（kDNA）的能力来测试拓扑异构酶II活性的抑制;该试验对拓扑异构酶II（α和β）的两种同种型都是特异性的，因为它依赖于链接的DNA转化为其螯合形式，这需要双链切割和由拓扑异构酶II独特地进行连接。在该测试中使用的DNA是Crithidia fasciculata的线粒体kDNA，其是DNA环的链接网络，其中大多数是2.5kb单体。 kDNA网络相对于单体而言较大并且不会在保留在孔中的凝胶中迁移，而小环可以容易地在琼脂糖凝胶中分离。凝胶和运行缓冲液都含有嵌入剂溴化乙锭，可以用紫外光源监测单体外观和不同DNA形式的分辨率（线性，带切口的环状DNA和松弛的DNA单体），有助于清楚地区分来自带切口的环状DNA的线性DNA。在该测试中，将200ng的kDNA在37℃下与10,1或0.1μM的阿霉素一起孵育1小时，或者在0.025U的人拓扑异构酶存在下以100,10或1μM的PNU-159682孵育1小时。 IIα在拓扑异构酶II反应缓冲液中（Tris-HCl pH 7.9 40mM，KCl 80mM，DTT 5mM，BSA15μg/ mL，ATP 1mM和MgCl 2 10mM）。在孵育期结束时，向每个样品中加入3μL凝胶上样缓冲液（二甲苯蓝0.25％，蓝色溴酚0.25％，Ficoll 400 18％和EDTA 6mM），然后用琼脂糖（1％）凝胶分析。电泳。在溴化乙锭0.5μg/ mL的存在下，在TBE缓冲液（Tris 89mM，硼酸89mM，EDTA 2mM，pH 8.0）中进行运行。样品以1V / cm的速度过夜。

将SKRC-52细胞接种于96孔板中的RPMI中，加入10％FCS（100μL），密度为每孔5000个细胞，并使其生长24小时。用含有不同浓度的测试物质（1：3稀释步骤）的培养基替换培养基，并在标准培养条件下培养板。 72小时后，除去培养基，加入在150μL培养基中的MTS细胞活力染料（20μL），将培养板在培养条件下孵育2小时，并在Spectra Max Paradigm多模板读数器上测量490nm处的吸光度。 。实验一式三份进行，平均细胞存活率计算为测量的背景校正吸光度除以未处理对照孔的吸光度。通过将数据拟合到四参数逻辑方程，使用Prism 6软件进行数据分析来确定IC 50值。

使用4-6周龄雌性CD-1无胸腺裸鼠评估PNU-159682对MX-1人乳腺癌异种移植物的活性。在第0天，用右侧胁腹的MX-1肿瘤片段皮下移植动物（n = 14）。 8天后，将它们随机分配到药物治疗组或对照组（每组n = 7只小鼠），并开始治疗。 PNU-159682根据q7dx3（三次剂量每7天）给予iv（4μg/ kg）时间表;对照动物接受盐水注射。用卡尺测量估计肿瘤体积;其中D和d分别是最长和最短的直径。出于伦理原因，对照动物在第21天被处死，此时该组的平均肿瘤体积约为2,500 mm3;监测接受药物治疗的动物直至第50天，此时将它们处死。

[1]. Quintieri L, et al. Formation and antitumor activity of PNU-159682, a major metabolite of nemorubicin in human liver microsomes. Clin Cancer Res. 2005 Feb 15;11(4):1608-17.

[2]. Scalabrin M, et al. Virtual Cross-Linking of the Active Nemorubicin Metabolite PNU-159682 to Double-Stranded DNA. Chem Res Toxicol. 2017 Feb 20;30(2):614-624.

[3]. Cazzamalli S, et al. Acetazolamide Serves as Selective Delivery Vehicle for Dipeptide-Linked Drugs to Renal Cell Carcinoma. Mol Cancer Ther. 2016 Dec;15(12):2926-2935.

Alpha-毒伞肽 | 一甲基澳瑞他汀E | 喜树碱 | 卡利奇霉素 | Daun02 | MMAF盐酸盐 | N,BETA,BETA-三甲基-L-苯基丙氨酰基-N-[(1S,2E)-3-羧基-1-(1-甲基乙基)-2-丁烯基]-N,3-二甲基-L-缬氨酰胺 | 安丝菌素P3 | Auristatin F. | 单甲基澳瑞他汀 D | 尾海兔素10 | 美登醇 | PF-06380101 | DXD | Auristatin E.