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乙基-2-氨基-6-溴-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-甲酰)-4H-苯并呋喃-3-羧酸

用途

HA14-1 是一种 Bcl-2/Bcl-xL 拮抗剂。HA14-1 与 Bcl-2 上的特定口袋结合, IC50 约为 9 μM,并抑制 Bcl-2 功能。

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名称

[ CAS 号 ]:
65673-63-4

[ 中文名 ]:
乙基-2-氨基-6-溴-4-(1-氰基-2-乙氧基-2-甲酰)-4H-苯并呋喃-3-羧酸

[ 英文名 ]:
HA14-1

[中文别名 ]:

[英文别名 ]:

S1071_Selleck
HA 14-1
HA14-1

生物活性

[ 描述 ]:

HA14-1 是一种 Bcl-2/Bcl-xL 拮抗剂。HA14-1 与 Bcl-2 上的特定口袋结合, IC50 约为 9 μM,并抑制 Bcl-2 功能。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 细胞凋亡 >> Bcl-2家族

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

Bcl-2:9 μM (IC50)

Bcl-xL

[体外研究]

HA14-1是Bcl-2表面袋的非肽配体。 HA14-1诱导Apaf-1和半胱天冬酶的活化,可能通过与Bcl-2蛋白结合并抑制其功能。 HA14-1与Bcl-2表面袋的相互作用似乎对HA14-1的化学结构具有特异性,因为发现含有各种修饰的HA14-1的一系列合成类似物具有广泛不同的Bcl-2结合活性。。为了检查HA14-1对细胞活力的影响,用不同浓度的HA14-1处理HL-60细胞4小时。 HA14-1以剂量依赖性方式诱导HL-60细胞死亡。在50μM时,HA14-1导致超过90％的细胞丧失活力[1]。 HA14-1是Bcl-2/Bcl-xL拮抗剂[2]。

[体内研究]

用BeGBM细胞(104注射sc)攻击瑞士裸鼠。在细胞注射后第2天,每周一次在注射部位给予100μL游离RPMI 1640-50％DMSO或单独的载体中的HA14-1(400nmol)。 HA14-1治疗对免疫缺陷小鼠中胶质母细胞瘤肿瘤的生长没有任何显着影响,如通过测量扩张肿瘤的体积每周两次监测。此外,在接受这种治疗的小鼠中没有检测到严重的器官毒性或体重减轻。为了分析HA14-1治疗是否可以提高另一种抗肿瘤治疗的效率,用人类多形性胶质母细胞瘤细胞攻击的瑞士裸鼠也给予低剂量依托泊苷(2.5 mg/kg,200μL0.9％NaCl,每周5天)细胞注射后第2天)与HA14-1或模拟治疗一起。尽管依托泊苷治疗本身不足以抑制胶质母细胞瘤细胞的生长,但其与HA14-1的组合导致对肿瘤生长的显着抑制,这可通过联合治疗增加肿瘤体积倍增时间的能力来判断[3]。。

[激酶实验]

体外有机化合物与Bcl-2蛋白的结合亲和力通过基于荧光偏振的竞争性结合测定来确定。对于该测定，5-羧基荧光素与肽的N末端偶联，GQVGRQLAIIGDDINR，衍生自Bak的BH3结构域（Flu-BakBH3），已显示其与Bcl-xL蛋白的表达口袋结合。亲和力（解离常数，KD，≈0.34μM）。根据我们的分子模拟研究和使用荧光偏振的结合测量，Flu-BakBH3肽以相似的亲和力（解离常数，KD，≈0.20μM）结合Bcl-2的表面口袋。在该测定中使用的Bcl-2是重组GST融合的可溶性蛋白质。在标准缓冲液条件下，在有机化合物存在或不存在下混合Flu-BakBH3和Bcl-2蛋白，并孵育30分钟。 Flu-BakBH3与Bcl-2蛋白的结合在配备有使用双路径长度石英池（500μL）的偏振器的LS-50发光光谱仪上测量。用480nm的垂直偏振光（激发狭缝宽度15nm）激发荧光团，并通过530nm的垂直和水平偏振器（发射狭缝宽度15nm）观察发射光的偏振值。通过测定不同浓度的化合物抑制Flu-BakBH3与Bcl-2结合的能力来评估每种化合物对Bcl-2蛋白的结合亲和力[1]。

[细胞实验]

通过使用CellTiter 96AQ试剂盒测试化合物对HL-60细胞活力的剂量依赖性作用。简而言之，将含有1×10 5个细胞的100μL培养基的细胞悬浮液接种到96孔板中，并与化合物（例如HA14-1; 10,20,30,40,50和60μM）一起孵育。不同浓度。通过在490nm处测量Wallac Victor计数器上的光密度来确定凋亡细胞的数量。细胞活力也通过血细胞计数器中的台盼蓝排除来确定[1]。

[动物实验]

小鼠[3]将6至7周龄雌性瑞士裸鼠在标准条件下维持2周，然后在第0天将104 BeGBM细胞（重悬于100μL游离RPMI 1640）皮下注射到后肢中。通过在细胞注射部位注射100μL游离RPMI 1640-50％DMSO中的400nmol HA14-1来完成HA14-1。治疗在第2天开始，并在接下来的4周内每周重复一次。对照小鼠接受相同体积的载体（100μL游离RPMI 1640-50％DMSO），具有相同的频率。依托泊苷治疗如下进行：在第2天和第3天，将依托泊苷（2.5mg / kg）或无菌生理盐水腹膜内给予HA14-1-或模拟治疗的动物，然后在接下来的4周内每周注射5次。每周两次由同一观察者用卡尺测量肿瘤大小。计算肿瘤体积。

[参考文献]

[1]. Wang JL, et al. Structure-based discovery of an organic compound that binds Bcl-2 protein and induces apoptosis of tumor cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 Jun 20;97(13):7124-9.

[2]. Kessel D, et al. Initiation of apoptosis and autophagy by the Bcl-2 antagonist HA14-1. Cancer Lett. 2007 May 8;249(2):294-9.

[3]. Manero F, et al. The small organic compound HA14-1 prevents Bcl-2 interaction with Bax to sensitize malignant glioma cells to induction of cell death. Cancer Res. 2006 Mar 1;66(5):2757-64.

[相关活性小分子]

物理化学性质

[ 密度 ]:
1.5±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
535.1±50.0 °C at 760 mmHg

[ 熔点 ]:
105ºC

[ 分子式 ]:
C₁₇H₁₇BrN₂O₅

[ 分子量 ]:
409.231

[ 闪点 ]:
277.4±30.1 °C

[ 精确质量 ]:
408.032074

[ PSA ]:
111.64000

[ LogP ]:
3.70

[ 外观性状 ]:
powder

[ 蒸汽压 ]:
0.0±1.4 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.574

[ 储存条件 ]:
−20°C

[ 水溶解性 ]:
DMSO: 26 mg/mL

安全信息

[ 个人防护装备 ]:
Eyeshields;Gloves;type N95 (US);type P1 (EN143) respirator filter

[ 安全声明 (欧洲) ]:
22-24/25

[ 危险品运输编码 ]:
NONH for all modes of transport

[ WGK德国 ]:
3

[ 海关编码 ]:
2932209090

合成路线

详细合成路线

上下游产品

上游产品

下游产品

海关

[ 海关编码 ]: 2932209090

[ 中文概述 ]:
2932209090. 其他内酯. 增值税率:17.0%. 退税率:13.0%. 监管条件:无. 最惠国关税:6.5%. 普通关税:20.0%

[ 申报要素 ]: 品名, 成分含量, 用途

[ Summary ]:
2932209090. other lactones. VAT:17.0%. Tax rebate rate:13.0%. . MFN tariff:6.5%. General tariff:20.0%

文献

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