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4-(4-氯苯基)-4-[4-(1H-吡唑-4-基)苯基]哌啶

用途

AT7867 是一种 ATP 竞争性的 Akt1/Akt2/Akt3 和 p70S6K/PKA 抑制剂,IC50 分别为 32 nM/17 nM/47 nM 和 85 nM/20 nM。

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名称

[ CAS 号 ]:
857531-00-1

[ 中文名 ]:
4-(4-氯苯基)-4-[4-(1H-吡唑-4-基)苯基]哌啶

[ 英文名 ]:
AT7867

[中文别名 ]:

达格列净

[英文别名 ]:

GVP
AT7867
S1558_Selleck
AT-7867,AT7867

生物活性

[ 描述 ]:

AT7867 是一种 ATP 竞争性的 Akt1/Akt2/Akt3 和 p70S6K/PKA 抑制剂,IC50 分别为 32 nM/17 nM/47 nM 和 85 nM/20 nM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> PKA

信号通路 >> 干细胞及 Wnt 通路 >> PKA

信号通路 >> MAPK/ERK信号通路 >> 核糖体S6激酶(RSK)

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

Akt2:17 nM (IC50)

Akt1:32 nM (IC50)

Akt3:47 nM (IC50)

PKA:20 nM (IC50)

[体外研究]

AT7867对AKT2的抑制显示为ATP竞争性,Ki为18nM。 AT7867还显示出针对结构相关的AGC激酶p70S6K和PKA的有效活性,但显示出对来自其他激酶亚家族的激酶的选择性的明确窗口。体外生长抑制研究表明,AT7867阻断了许多人癌细胞系的增殖。 AT7867在抑制MES-SA子宫,MDA-MB-468和MCF-7乳腺,HCT116和HT29结肠系(IC50值范围为0.9-3μM)中的增殖效果最强,在两种前列腺中效果最差测试线(IC50值范围为10-12μM)[1]。

[体内研究]

体内：以20mg/kg口服给药后,血浆中AT7867的消除似乎与静脉内给药后观察到的相似。在口服20mg/kg剂量后,AT7867的血浆水平保持在0.5μM以上至少6小时。假设静脉内给药后的线性药代动力学,通过口服途径的生物利用度计算为44％。因此,用该模型进行体内药效学(PD)生物标志物研究。在药代动力学和耐受性研究之后,将AT7867(90mg/kg po或20mg/kg ip)的剂量施用于携带MES-SA肿瘤的无胸腺小鼠,并随时间监测肿瘤中GSK3β和S6RP的磷酸化状态。在用AT7867处理后2和6小时观察到对途径活性的两种标志物的磷酸化的明显抑制。到24小时,GSK3β和S6RP的总水平大大降低[1]。

[激酶实验]

AKT2，PKA，p70S6K和CDK2 / cyclinA的激酶测定均以辐射测量滤光片结合形式进行。在化合物存在下建立测定反应。对于AKT2，AKT2酶和25μMAKTide-2T肽（HARKRERTYSFGHHA）在20mM MOPS，pH7.2,25mMβ-甘油磷酸盐，5mM EDTA，15mM MgCl 2,1mM原钒酸钠，1mM DTT，10中孵育。 μg/ mL BSA和30μMATP（1.16Ci / mmol），持续4小时。对于PKA，将PKA酶和50μM肽（GRTGRRNSI）在2mM MOPS，pH7.2,25mMβ-甘油磷酸盐，5mM EDTA，15mM MgCl 2,1mM原钒酸盐，1mM DTT和40μMATP（0.88）中孵育。 C 1 / mmol）20分钟。对于p70S6K，将p70S6K酶和25μM肽底物（AKRRRLSSLRA）在10mM MOPS，pH 7,0.2mM EDTA，1mM MgCl 2,0.01％β-巯基乙醇，0.1mg / mL BSA，0.001％Brij-35中孵育， 0.5％甘油和15μMATP（2.3Ci / mmol），持续60分钟。对于CDK2，将CDK2 / cyclinA酶和0.12μg/ ml组蛋白H1在20mM MOPS，pH7.2,25mMβ-甘油磷酸盐，5mM EDTA，15mM MgCl 2,1mM原钒酸钠，1mM DTT，0.1mg中孵育。 / ml BSA和45μMATP（0.78Ci / mmol），持续4小时。通过加入过量的正磷酸终止测定反应，然后将停止的反应混合物转移到Millipore MAPH滤板中并过滤。然后洗涤板，加入闪烁剂，并通过Packard TopCount上的闪烁计数测量放射性。使用GraphPad Prism软件从重复曲线计算IC 50值。进行AKT1和3酶测定，同时进行所有其他酶测定[1]。

[细胞实验]

将细胞以每孔16,000个细胞接种于96孔微量培养板中，在补充有10％FBS的培养基中培养24小时，然后用AT7867处理。将AT7867或载体对照加入细胞1小时。然后，用3％多聚甲醛，0.25％戊二醛，0.25％Triton-X100固定细胞，洗涤并用含有0.1％Tween-20（TBST）的tris缓冲盐水中的5％牛奶封闭，然后与磷酸盐一起孵育过夜。 GSK3β（丝氨酸9）抗体。然后洗涤平板，加入二抗，并使用DELFIA试剂进行信号增强。将铕计数标准化为蛋白质浓度，并使用非线性回归分析和S形剂量响应（可变斜率）方程[1]在GraphPad Prism中计算每种抑制剂的IC 50值。

[动物实验]

小鼠[1]使用雄性无胸腺BALB / c小鼠（nu / nu）。将单剂量的AT7867以5mg / kg静脉内（iv）和20mg / kg口服（po）给予BALB / c小鼠。在以下每个时间点从重复动物收集血浆样品;静脉内给药后0.083,0.167,0.33,0.67,1,2,4,6,16和24小时以及给药后0.25,0.5,1,2,4,6和24小时。通过心脏穿刺对小鼠进行放血，并且将所有血液样品离心以获得血浆，然后将其在-20℃冷冻直至分析。对于生物分析，通过用含有内标的乙腈进行蛋白质沉淀来制备所有血浆样品。通过与用AT7867构建的标准校准线和使用抑制剂特异性液相色谱串联质谱（LC-MS / MS）方法进行比较，对样品提取物进行定量。确定药代动力学参数。

[参考文献]

[1]. Grimshaw KM, et al. AT7867 is a potent and oral inhibitor of AKT and p70 S6 kinase that induces pharmacodynamic changes and inhibits human tumor xenograft growth. Mol Cancer Ther, 2010, 9(5), 1100-1110.

[相关活性小分子]

物理化学性质

[ 密度 ]:
1.2±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
530.2±50.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₂₀H₂₀ClN₃

[ 分子量 ]:
337.846

[ 闪点 ]:
274.5±30.1 °C

[ 精确质量 ]:
337.134583

[ PSA ]:
40.71000

[ LogP ]:
4.41

[ 蒸汽压 ]:
0.0±1.4 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.616

[ 储存条件 ]:
-20°C

4-(4-氯苯基)-4-[4-(1H-吡唑-4-基)苯基]哌啶

用途

名称

生物活性

物理化学性质

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