RS 127445

RS 127445 是一种选择性的 5-HT2B 受体拮抗剂,pKi 为 9.5。

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研究领域 >> 神经疾病

5-HT1A Receptor:5.5 (pKi)

5-HT1B/D Receptor:<6 (pKi)

5-HT3 Receptor:<6 (pKi)

5-HT5 Receptor:<6 (pKi)

5-HT6 Receptor:<6 (pKi)

5-HT2A Receptor:6.3 (pKi)

5-HT2C Receptor:6.4 (pKi)

5-HT2B Receptor:9.5 (pKi)

发现RS-127445对5-HT2B受体具有纳摩尔亲和力(pKi = 9.5±0.1),并且与许多其他受体和离子通道结合位点相比,对该受体具有1,000倍的选择性。 RS-127445有效地置换CHO-K1细胞中表达的人重组5-HT2B受体的[3H] -5-HT。 RS-127445对5-HT2B受体的亲和力(pKi值)为9.5±0.1(n = 9)。 RS-127445对5-HT2B受体具有选择性,对人重组5-HT2A,5-HT2C,5-HT5,5-HT6和5-HT7受体的亲和力约为1000倍,大鼠中的5-HT1A受体脑膜,牛尾状核中的5-HT1B/D受体和兔血小板中的单胺摄取位点。 RS-127445有效阻断表达5-HT2B受体的HEK-293细胞中5-HT(10nM)引起的细胞内钙浓度的增加(pIC50为10.4±0.1)。在表达人重组5-HT2B受体的细胞中,RS-127445有效拮抗5-HT诱发的肌醇磷酸形成(pKB = 9.5±0.1)和5-HT诱发的细胞内钙增加(pIC10 = 10.4±0.1)。 RS-127445还可阻断5-HT诱发的大鼠离体胃底部收缩(pA2B = 9.5±1.1)和(±)α-甲基-5-HT介导的大鼠颈静脉松弛(pA2 = 9.9±0.3)[ 1]。

在大鼠中,通过口服或腹膜内途径生物可利用的RS-127445的比例分别为14％和60％。腹膜内施用RS-127445(5mg/kg)产生的血浆浓度预计可使可接近的5-HT2B受体完全饱和至少4小时。通过口服,腹膜内和静脉内途径给予大鼠RS-127445(5mg/kg) 。在静脉内和腹膜内给药后(0.08小时)和通过口服给药途径给药后0.25小时测量的第一时间点发现最高浓度,迅速达到峰值血浆浓度。从等离子体中清除RS-127445,估计终末消除半衰期约为1.7小时。当通过口服和腹膜内途径给药时,RS-127445的生物利用度约为静脉内给药所得的生物利用度的14％和62％。大约60％的腹膜内剂量和14％的口服剂量RS-127445(5 mg/kg)是生物可利用的[1]。 RS-127445(1-30 mg/kg),剂量依赖性地减少粪便输出,在10和30 mg/kg(n = 6-11)时达到显着性。在血液和大脑中,> 98％的RS-127445是蛋白质结合的[2]。

使用磷酸盐缓冲盐水中的2mM EDTA收获表达人5-HT2A，5-HT2B或5-HT2C受体的CHO-K1细胞。通过四个均质化循环（Brinkman P10破碎剂）和离心（48,000×g，15分钟）制备细胞膜。如前所述，建立每个测定以实现稳态条件并优化特异性结合。对于5-HT2A受体，将来自1×10 6个细胞的膜与0.2nM [3H] - 酮色林在32℃下孵育60分钟。使用10μM甲基麦角酰胺测定非特异性结合。对于5-HT2B受体，将来自1.5×10 6个细胞的膜与0.2nM [3H] -5-HT在4℃温育120分钟。使用10μM5-HT测定非特异性结合。对于5-HT2C受体，将来自3×10 5个细胞的膜与0.5nM [3H] - 美舒麦白在32℃温育60分钟。使用10μM甲基麦角酰胺测定非特异性结合。通过已经用0.1％聚乙烯亚胺预处理的玻璃纤维过滤器（GF / B）进行真空过滤来终止测定。通过液体闪烁计数测定总和结合放射性。在这些测定中的每一种中实现大于90％的特异性结合。通过在超过100个额外的离子通道或受体结合位点测试化合物的亲和力，进一步检查RS-127445对5-HT2B受体的选择性。这些研究由Cerep使用标准方案[1]进行。

将表达人5-HT2B受体的HEK-293细胞与[3H] - 肌醇（1.67μCi/ mL）在162cm 2烧瓶中在37℃下在含有10％透析的胎牛血清的无肌醇的Ham's F12培养基中温育过夜。收获细胞，用磷酸盐缓冲盐水洗涤五次，并以约3×10 6个细胞/ mL的密度重悬于无肌醇的Ham's F12培养基中。 RS-127445（10μM）最初溶解于10％（v / v）DMSO和90％无肌醇的Ham's F12培养基中。随后用不含肌醇的Ham's F12培养基稀释。将5-HT溶于含有100mM LiCl和1mM抗坏血酸的无肌醇的Ham's F12培养基中。将RS-127445，载体或其他拮抗剂与240μL细胞悬浮液在37℃预温育20分钟。通过添加5-HT引发反应。 60分钟后，通过加入50μL冰冷的20％高氯酸终止反应，在冰水浴中冷却10分钟，然后用160μL1NKOH中和。每种样品在室温下用2ml 50mM Tris-HCl，pH 7.4稀释。将含水部分（2.2mL）转移到已用5ml蒸馏水洗涤的Dowex AG1X8柱（1ml，1：1，w / v）上。然后用18ml蒸馏水洗涤柱子，用3ml 1N HCl洗脱肌醇磷酸酯。使用Packard 1900CA分析仪[1]通过液体闪烁光谱测定洗脱的放射性。

大鼠[1]使用雄性Sprague-Dawley大鼠（200g）。为了比较不同给药途径后RS-127445的血浆动力学，将90只大鼠分成三个治疗组，每组30只大鼠。向每只大鼠施用单剂量的RS-127445（5mg / kg）溶解（2.5mg / mL）的乙醇：丙二醇：水（10：50：40，v：v：v）。在给药后0.08,0.25,0.5,1,2,4,8和24小时，将大鼠麻醉并通过心脏穿刺收集血液样品。小鼠[2]使用成年雄性C57BL / 6J小鼠（25-30g）。 RS-127445（1nM-10μM，每组织单一浓度，15分钟接触时间）或载体（5或50μLDMSO）的作用表示为与四种前药的平均振幅相比的振幅变化百分比。 ，EFS后的收缩反应。使用双样本等方差t检验分析结果。

[1]. Bonhaus DW, et al. RS-127445: a selective, high affinity, orally bioavailable 5-HT2B receptor antagonist. Br J Pharmacol. 1999 Jul;127(5):1075-82.

[2]. Bassil AK, et al. Inhibition of colonic motility and defecation by RS-127445 suggests an involvement of the 5-HT2B receptor in rodent large bowel physiology. Br J Pharmacol. 2009 Sep;158(1):252-8

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