PF-AKT400

PF-AKT400 是一种有效的, ATP 竞争性的选择性 Akt 抑制剂,对 PKBα (IC50=0.5 nM) 的选择性比 PKA (IC50=450 nM) 高 900 倍。

研究领域 >> 癌症

PKBα:0.5 nM (IC50)

PKA:450 nM (IC50)

PF-AKT400(化合物42)相对于早期的引物如螺二吲哚2提供显着增强的Akt选择性。分别估计磷酸-S6还原(110nM)和Akt过度磷酸化(216nM)的游离IC50和EC50值。这些值与测量p-GSK-3α(310 nM)的U87细胞中PF-AKT400的细胞IC50相当[2]。

随后评估PF-AKT400在肿瘤和多种抗体功效的体内小鼠模型中对Akt的调节。它在PC3前列腺癌异种移植实验中具有活性,在100mg/kg bid给药10天时观察到75％TGI。在结肠直肠癌(Colo205)异种移植研究中,PF-AKT400在10天后以150mg/kg bid产生60％TGI。最有趣的是,与雷帕霉素(10 mg/kg,ip)组合,75 mg/kg bid(10天)PF-AKT400在另外的PC3前列腺癌异种移植研究中产生98％TGI,而56％TGI和66％ TGI与PF-AKT400和雷帕霉素作为单一药剂。为了确定PF-AKT400(化合物42)在PC3异种移植物模型中的体内效力,随着时间的推移用血液和肿瘤取样进行口服25,75和100mg/kg PF-AKT400。源自PC3肿瘤的去污剂可溶性提取物的免疫印迹分析显示,在产生显着肿瘤生长抑制的剂量下,治疗后S6磷酸化显着降低,Akt过度磷酸化。口服给药剂量在25-100mg/kg(Tmax = 0.5h)后,血浆药物浓度迅速达到峰值。分别在给予PF-AKT400后约2-4小时和1小时观察到磷酸-S6和磷酸-Akt的峰PD反应。 PD标记反应的时间过程由PK/PD模型很好地描述,剂量范围从无功效(25mg/kg)到最大功效(100mg/kg)[2]。

使用荧光偏振IMAP型测定。将15μL稀释的PF-AKT400（化合物42）在DMSO中的量与60μL反应缓冲液（10mM Tris-HCl，pH 7.5,10mM MgCl 2,0.1mM EGTA，0.01％Triton-X100,1mM）混合。 DTT）。然后将5μL化合物/缓冲液混合物，10μL含有4μMATP和40nM荧光标记的Crosstide（Tamara标记的GRPRTSSFAEG肽）的溶液和5μL的Akt1蛋白（缺乏pleckstrin同源性（PH）结构域），在反应缓冲液中含有位于473位的Asp，并在Thr 308处预磷酸化的氨基酸合并。孵育90分钟后，加入IMAP珠并读取平板（灯过滤器，544nm;发射滤光片，615nm）。可以将相同的程序应用于全长Akt1以提供类似的结果。所有IC50值都是至少n = 2次测定的几何平均值[2]。

小鼠[2]描述PF-AKT400的PK / PD关系的研究在携带皮下PC3前列腺癌异种移植物的雄性SCID / Beige小鼠中进行。一旦肿瘤大小达到约300mm 3，PF-AKT400就配制在0.5％甲基纤维素载体中，并且每剂量组口服给予3只小鼠。随时间收获血浆和肿瘤，制备肿瘤裂解物，并通过免疫印迹评估磷酸化S6还原和磷酸化Akt诱导的水平。

[1]. Chen SF, et al. Binding selectivity studies of PKBα using molecular dynamics simulation and free energy calculations. J Mol Model. 2013 Nov;19(11):5097-5112.

[2]. Freeman-Cook KD, et al. Design of selective, ATP-competitive inhibitors of Akt. J Med Chem. 2010 Jun 24;53(12):4615-4622.

4-(4-氟苯基)-2-(4-甲基亚磺酰基苯基)-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑 | MK-2206 2HCl | 2-氨基-6-氯-alpha-氰基-3-(乙氧羰基)-4H-1-苯并吡喃-4-乙酸乙酯 | Capivasertib (AZD5363) | 和厚朴酚 | 1,3-二氢-1-[1-[4-(6-苯基-1H-咪唑并[4,5-g]喹喔啉-7-基)苯基甲基]-4-哌啶基]-2H-苯并咪唑-2-酮(AKT抑制剂VIII) | Ipatasertib | 土大黄甙 | Uprosertib | 1,3-二咖啡酰奎宁酸 | TIC10 | 曲西立滨 | Perifosine (KRX-0401) | Afuresertib | (ALPHAS)-ALPHA-[[[5-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-吡啶基]氧基]甲基]-(S)-1H-吲哚-3-乙胺