贝利司他

Belinostat 是一种有效的 HDAC 抑制剂,在 HeLa 细胞提取物中的 IC50 为 27 nM。

信号通路 >> 自噬 >> 自噬

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> HDAC

信号通路 >> 表观遗传学 >> HDAC

研究领域 >> 癌症

HDAC6:82 nM (IC50)

HDAC:27 nM (IC50, Hela cell)

Belinostat(PXD101)诱导肿瘤细胞系中组蛋白H4乙酰化的浓度依赖性(0.2-5μM)增加。 Belinostat在许多肿瘤细胞系中具有细胞毒性,IC50在0.2-3.4μM范围内,通过克隆形成测定法测定并诱导细胞凋亡。 Belinostat在体外抑制许多人肿瘤细胞系的生长,其中IC50通过克隆形成试验确定,范围为0.2-3.4μM[1]。 Belinostat(PXD101)是一种有效的组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂,有效抑制纯化的重组HDAC6的酶活性(IC50为82 nM)[2]。

每天用Belinostat(10-40mg/kg /天ip)处理携带人卵巢和结肠肿瘤异种移植物的裸鼠7天导致显着的剂量依赖性生长延迟,对小鼠没有明显的毒性迹象。对于顺铂抗性卵巢肿瘤细胞的异种移植物也观察到生长延迟。在用Belinostat(PXD101)处理3小时后,在小鼠的血液和肿瘤中检测到H4乙酰化的显着增加。抑制人肿瘤异种移植物在小鼠中的生长,没有明显的毒性[1]。 Belinostat(PXD101)对人A2780卵巢癌sc异种移植物具有单药抗肿瘤活性,通过与卡铂联合治疗增强[2]。

对于活性测定，反应在总体积为150μL的缓冲液[含有30％甘油的60mM Tris（pH 7.4）]中进行，所述缓冲液含有2μL细胞提取物，并且在使用时，使用2μLBelinostat。通过加入2μL[3H]标记的底物（对应于20个NH 2 - 末端残基的乙酰化组蛋白H4肽）开始反应。将样品在37℃下孵育45分钟，并通过加入HCl和乙酸（分别为0.72和0.12M终浓度）终止反应。将释放的[3H]乙酸盐萃取到750μL乙酸乙酯中，并将样品以12,000×g离心5分钟。将上相（600μL）转移至3mL闪烁液中并计数[1]。

人卵巢细胞系A2780和顺铂（A2780 / cp70）和多柔比星（2780AD）抗性衍生物在补充有谷氨酰胺（2mM）和FCS（10％）的RPMI 1640中生长。人结肠（HCT116和HT29），黑素瘤（HS852），前列腺（PC3），肺（CALU-3）和乳腺（MCF7）细胞系在RPMI 1640中生长，其余的在如上补充的DMEM中生长。人非小细胞肺癌细胞系WIL在如上补充的DMEM中生长。通过克隆形成测定确定药物敏感性。简言之，将细胞以8×10 4个细胞/ 25cm 2烧瓶的密度接种在5mL培养基中，使其附着并生长48小时。将细胞暴露于Belinostat（五种浓度，0.016至10μM）24小时。除去培养基，向每个烧瓶中加入1mL胰蛋白酶/ EDTA。一旦细胞脱离，加入1mL培养基，重悬细胞，计数来自对照未处理烧瓶的培养基。将细胞稀释并接种到6cm培养皿（每个烧瓶中三个）中，密度为500-2000个细胞/皿，这取决于细胞系。将来自药物处理的烧瓶的细胞稀释并如同对照烧瓶一样铺板。将培养皿在37℃下培养10-15天。用PBS洗涤细胞，在甲醇中固定，用结晶紫染色，计数含有≥50个细胞的菌落。灵敏度表示为IC50（三次实验的平均值±SE），定义为将菌落数减少至对照未处理细胞的50％所需的药物浓度[1]。

小鼠[1]对于人肿瘤异种移植物研究，用胰蛋白酶/ EDTA（PBS中0.25％/ 1mM）收获单层培养物并重悬于PBS中。将约107个细胞皮下注射到无胸腺裸鼠（CD1 nu / nu小鼠）的右侧。在平均肿瘤直径≥0.5cm的10-15天后，将动物随机分成六组进行实验。将Belinostat溶于DMSO中，然后在水中稀释，使DMSO的终浓度为10％，并在指定的时间腹膜内施用。该配方对≤40mg/ kg的剂量提供足够的溶解度。每天称重小鼠，并通过卡尺测量估计肿瘤体积，假设球形几何形状（体积= d3×π/ 6）。

[1]. Plumb JA, et al. Pharmacodynamic response and inhibition of growth of human tumor xenografts by the novel histonedeacetylase inhibitor PXD101. Mol Cancer Ther. 2003 Aug;2(8):721-8.

[2]. Qian X, et al. Activity of PXD101, a histone deacetylase inhibitor, in preclinical ovarian cancer studies. Mol Cancer Ther. 2006 Aug;5(8):2086-95.

[3]. Chia S, et al. Phenotype-driven precision oncology as a guide for clinical decisions one patient at a time. Nat Commun. 2017 Sep 5;8(1):435.

曲古柳菌素A | 恩替诺特 | 罗米地辛 | 阿比特龙 | Ricolinostat (ACY-1215) | 丁酸钠 | RGFP966 | JNJ-26481585 | HDAC6 抑制剂 | 萝卜硫素 | N-羟基-2-[[[2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-(吗啉-4-基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基]甲基](甲基)氨基]嘧啶-5-甲酰胺 | N-[[6-(羟基氨基)-6-氧代己基]氧基]-3,5-二甲基-苯甲酰胺 | 4-乙酰氨基-N-(2'-氨基苯基)-苯甲酰胺 | Tubastatin A | 4-苯基丁酸钠盐