(R)-2-氨基-7-[4-氟-2-(6-甲氧基吡啶-2-基)苯基]-4-甲基-7,8-二氢-6H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-5-酮

NVP-HSP990 是一种有效的,选择性的 Hsp90 抑制剂,对 Hsp90α,Hsp90β 和 Grp94 的 IC50 值分别为 0.6,0.8 和 8.5 nM。

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研究领域 >> 癌症

HSP90α:0.6 nM (IC50)

HSP90β:0.8 nM (IC50)

GRP94:8.5 nM (IC50)

TRAP1 ATPase:320 nM (IC50)

NVP-HSP990是一种有效的选择性Hsp90抑制剂,Hsp90α,Hsp90β和Grp94的IC50值分别为0.6,0.8和8.5 nM。 NVP-HSP990(10μM)显示对拓扑异构酶II(一种与Hsp90密切相关的GHKL(Gyrase,Hsp90,组氨酸激酶,MutL)家族ATP酶)的ATP酶活性没有影响。 NVP-HSP990还对CTL-16细胞中的c-Met,Hsp70,p-ERK和p-AKT发挥有效作用,EC50分别为37±4,20±2,11±1和6±1nM。 NVP-HSP990抑制BT474,A549,H1975和MV4; 11细胞的增殖,GI50分别为7±2,28±5,35±4和4±1nM [1]。 NVP-HSP990抑制GTL-16的细胞增殖,EC50为14 nM [2]。 NVP-HSP990(5-500nM)抑制多发性骨髓瘤细胞系,处理72小时后IC50为27-49nM。 NVP-HSP990诱导多发性骨髓瘤细胞系(0-100 nM)凋亡,导致G2/M期(25-200 nM)细胞周期停滞,并通过caspase-8诱导细胞凋亡,然后激活caspase-3(100纳米)。 NVP-HSP990增加HSP70表达并与Akt和ERK信号传导相互作用。此外,NVP-HSP990(100 nM)与美法仑组合,对多发性骨髓瘤细胞的生长抑制产生协同作用,并增加胱天蛋白酶-3,半胱天冬酶-8和半胱天冬酶-9的裂解并激活半胱天冬酶-2 [3]。

NVP-HSP990(每周两次2.5至5mg/kg,或每周5至15mg/kg,po)引起剂量成比例的抗肿瘤功效,在携带GTL-16肿瘤的小鼠中没有明显的损失或明显的毒性迹象。 NVP-HSP990(每周5或10mg/kg,po)也导致BT-474乳腺癌模型中肿瘤生长的显着抑制。 NVP-HSP990(每周两次5mg/kg或每周15mg/kg,po)在MV4; 11异种移植物模型中抑制肿瘤的生长。此外,NVP-HSP990(每天0.5mg/kg,每周两次14,5mg/kg,或每周15mg/kg,po)在H1975和A549肿瘤模型中显示出抗肿瘤功效[1]。 NVP-HSP990(5,15 mg/kg,po)显示c-Met水平的延长抑制,减少30％和50％,并且在GTL-16肿瘤异种移植物中显示出抗肿瘤活性[2]。

将His标记的Hsp90αN末端结构域蛋白（N-Hsp90α-His）稀释至由50mM Hepes，pH7,6mM MgCl2,20mM KCl和0.1％BSA组成的测定缓冲液中的最终浓度的2倍。将Hsp90以每孔50μL分配到96孔聚丙烯板中。在单独的聚丙烯板中，将测试化合物（NVP-HSP990）在100％DMSO中稀释至其最终浓度的40倍。 DMSO中的系列稀释液以3倍的增量进行。将2.5μL稀释的化合物转移至50μL的Hsp90中并混合。背景孔接收25μM（终浓度）根赤壳菌素。将生物素 - 根赤壳菌素以2倍最终浓度稀释到测定缓冲液中，并将50μL加入到Hsp90 /化合物板中。 DMSO的终浓度为2.5％。将样品在室温下温育2小时，然后将50μL转移至NeutrAvidin包被的平板。将板孵育1小时，用DELFIA洗涤缓冲液（5mM Tris，pH 7.5,0.1％吐温20,0.1％叠氮化钠，0.9％NaCl）洗涤3次，然后每孔50μL3nMEu-anti-His洗涤。稀释到DELFIA测定缓冲液中。接着将板在室温下孵育2小时，洗涤4次，然后加入50μL增强溶液。将板轻轻摇动7-10分钟，然后在VICTOR2仪器中读数[2]。

将GTL-16细胞（1×103）接种到96孔组织培养板中并在37℃，5％CO 2下培养。将系列稀释的化合物（NVP-HSP990）加入细胞中并孵育72小时。在37°C，5％CO2。使用细胞活力测定法测定细胞增殖[2]。

人肿瘤异种移植模型GTL-16，NCI-H1975，BT474和MV4; 11在裸鼠或重症联合免疫缺陷小鼠中皮下植入50％基质胶。当肿瘤达到200至500mm 3时，将小鼠随机分组（10只小鼠/组用于功效）。 NVP-HSP990在100％聚乙二醇（PEG400）的载体中口服给药。使用以下公式将肿瘤卡尺测量值转换成肿瘤体积：[长度×（宽度）2] / 2。相对肿瘤抑制计算为％T / C = 100×dT / dC，其中，dT或dC =研究最后一天药物治疗（T）或载体（C）的平均肿瘤体积与随机化体积的差异。使用单向ANOVA进行统计学比较，然后进行Dunn或Tukey事后检验。差异有统计学意义，P <0.05 [1]。

[1]. Menezes DL, et al. The novel oral Hsp90 inhibitor NVP-HSP990 exhibits potent and broad-spectrum antitumor activities in vitro and in vivo. Mol Cancer Ther. 2012 Mar;11(3):730-9.

[2]. McBride CM, et al. Design, structure-activity relationship, and in vivo characterization of the development candidate NVP-HSP990. J Med Chem. 2014 Nov 13;57(21):9124-9.

[3]. Lamottke B, et al. The novel, orally bioavailable HSP90 inhibitor NVP-HSP990 induces cell cycle arrest and apoptosis in multiple myeloma cells and acts synergistically with melphalan by increased cleavage of caspases. Eur J Haematol. 2012 May;88(5):406-15.

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