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贝尔纳卡桑(VX-765)

贝尔纳卡桑(VX-765)用途

VX-765 是一种口服活性的 IL-转化酶/caspase-1 抑制剂，抑制 IL-1β 释放。

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贝尔纳卡桑(VX-765)名称

[ CAS 号 ]:
273404-37-8

[ 中文名 ]:
N-(4-氨基-3-氯苯甲酰基)-3-甲基-L-缬氨酰-N-[(2R,3S)-2-乙氧基四氢-5-氧代-3-呋喃基]-L-脯氨酰胺

[ 英文名 ]:
VX-765

[英文别名 ]:

vx765
Belnacasan
VX-765

贝尔纳卡桑(VX-765)生物活性

[ 描述 ]:

Belnacasan (VX-765) 是 VRT-043198 的口服前药,是一种有效,选择性的 caspase-1 抑制剂,Ki为0.8 nM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 细胞凋亡 >> 胱天蛋白酶

研究领域 >> 炎症/免疫

[ 靶点 ]

Caspase-1

[体外研究]

Belnacasan抑制人PBMC释放LPS诱导的IL-1β和IL-18,IC50为~0.7μM,并减少炎症性疾病小鼠的炎症反应[1]。 VBelnacasan是caspase-1亚家族的有效特异性抑制剂[2]。

[体内研究]

Belnacasan剂量显着增加50,100和200 mg/kg(p <0.05)可使血清IL-1β水平降低多达60％,而25 mg/kg则具有较小的效果(约35％抑制),但无统计学意义。值得注意的是,Belnacasan对LPS诱导的IL-1β释放的作用达到100mg/kg的平台期。 Belnacasan(25,50和100 mg/kg×2)可显着减轻耳水肿。 Belnacasan还剂量依赖性地降低耳部活检样本中细胞因子,趋化因子和炎症介质的浓度[2]。 Belnacasan剂量为25,50和200 mg/kg时,癫痫发作时间显着延迟1.5至2倍(p <0.01),癫痫发作次数减少40％(p <0.01),并且总时间缩短脑电图癫痫发作活动率为30％至50％(p <0.01)[3]。

[激酶实验]

通过如下跟踪用对硝基苯胺或氨甲基香豆素（AMC）标记的合适底物的水解速率来测定酶抑制：ICE /半胱天冬酶-1，suc-YVAD-对硝基苯胺; caspase-4，Ac-WEHD-AMC; caspase-6，Ac-VEID-AMC; caspase-3，-7，-8和-9，Ac-DEVD-AMC;和颗粒酶B，Ac-IEPD-AMC。将酶和底物在反应缓冲液[10mM Tris，pH 7.5,0.1％（w / v）CHAPS，1mM二硫苏糖醇和5％（v / v）DMSO]中于37℃温育10分钟。将甘油以8％（v / v）加入缓冲液中，用于胱天蛋白酶-3，-6和-9以及颗粒酶B，以改善酶的稳定性。使用荧光计监测底物水解速率。进行组织蛋白酶B和胰蛋白酶的检测[2]。

[细胞实验]

总共2×10 5个细胞/孔（100μL细胞悬浮液）在平底96孔板中一式三份分布。将50μLBelnacasan（40μM，在含有0.2％DMSO的RPMI 1640完全培养基中）或载体对照加入适当的孔中。在37℃温育30分钟后，加入50μL在RPMI 1640完全培养基中稀释的LPS，终浓度为0.001-10ng / mL。将细胞返回37℃培养箱。加入LPS后4小时，从孔中取出75μL上清液，通过以1500rpm离心5分钟澄清，并在4℃下储存直至测定。将细胞返回37℃培养箱直至加入LPS后24小时，此时除去100μL上清液，通过离心澄清，并储存在4℃。使用ELISA试剂盒测试上清液中的IL-1β，IL-6，IL-18和IL-1α[1]。

[动物实验]

小鼠[2]通过口服强饲法给予载体（25％Cremophor EL水溶液）单剂量的Belnacasan（10,21,43和84mg / kg）。在给药前和在通过眶后窦给药后0.167,0.25,0.5,1,1.5,2,3,4,6,8和24小时收集血样（约0.25-0.3mL）并处理血浆。高效液相色谱/质谱法用于测定血浆样品中Belnacasan和VRT-043198的浓度。使用WinNonlin Pro 4.0.1版进行非隔室分析。大鼠[3]使用雄性Sprague-Dawley大鼠（250-280g）。将Belnacasan（25,50,200mg / kg）溶解于20％Cremophor中，并且每天一次腹膜内注射，连续3天。在第4天，大鼠在海马内注射红藻氨酸之前45分钟和10分钟接受Belnacasan。在红藻氨酸之前类似地向载体注射各个对照。

[参考文献]

[1]. Stack JH, et al. IL-converting enzyme/caspase-1 inhibitor VX-765 blocks the hypersensitive response to an inflammatory stimulus in monocytes from familial cold autoinflammatory syndrome patients. J Immunol. 2005 Aug 15;175(4):2630-4.

[2]. Wannamaker W, et al. (S)-1-((S)-2-{[1-(4-amino-3-chloro-phenyl)-methanoyl]-amino}-3,3-dimethyl-butanoyl)-pyrrolidine-2-carboxylic acid ((2R,3S)-2-ethoxy-5-oxo-tetrahydro-furan-3-yl)-amide (VX-765), an orally available selective interleukin (IL)-converting enzyme/caspase-1 inhibitor, exhibits potent anti-inflammatory activities by inhibiting the release of IL-1beta and IL-18. J Pharmacol Exp Ther. 2007 May;321(2):509-16.

[3]. Ravizza T, et al. Inactivation of caspase-1 in rodent brain: a novel anticonvulsive strategy. Epilepsia. 2006 Jul;47(7):1160-8.

[4]. Xu Y, et al. NLRP3 inflammasome activation mediates estrogen deficiency-induced depression- and anxiety-like behavior and hippocampal inflammation in mice. Brain Behav Immun. 2016 Aug;56:175-86.

[5]. Zhuang J, et al. TDP-43 upregulation mediated by the NLRP3 inflammasome induces cognitive impairment in 2 2',4,4'-tetrabromodiphenyl ether (BDE-47)-treated mice. Brain Behav Immun. 2017 Oct;65:99-110.

[相关活性小分子]